二十碳五烯酸联合依托泊苷对肺腺癌A-549细胞株的抑制作用

摘要

目的：探讨二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，EPA）及联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞株的抑制作用。
　　方法：分组：细胞（对照组、EPA40μg/ml、依托泊苷10μg/ml组、EPA40μg/ml+依托泊苷10μg/ml组、依托泊苷20μg/ml组、EPA40μg/ml+依托泊苷20μg/ml组），动物（对照组、EPA组、依托泊苷组、EPA+依托泊苷组）。应用MTT法、形态学观察、流式细胞术、免疫细胞化学染色和检测活性氧、细胞端粒酶、测量肿瘤直径、腹水量及腹水中细胞数的变化来观察联合依托泊苷干预后的变化。
　　结果：1、MTT法：48h抑制率对照组/EPA40μg/ml组(2.06±0.56vs10.29±1.74，P=0.000）、依托泊苷10μg/ml组/EPA40μg/ml+依托泊苷10μg/ml组（33.41±3.44vs44.50±3.71，P=0.000）、依托泊苷20μg/ml组/EPA40+依托泊苷10μg/ml组（44.64±4.77vs44.50±3.71，P=0.9288）、依托泊苷20μg/ml组/EPA40μg/ml+依托泊苷20μg/ml组（44.64±4.77v50.72±4.61，P=0.000）。2、形态学观察：药物干预后细胞凋亡增加，联合组凋亡更加明显；3、ROS：实验组光密度值增加（与对照组比较P<0.05），联合组增加更加明显。4、流式细胞术：G0/GI期细胞减少，S期和G2/M期细胞增多,提示肺腺癌A-549细胞株被阻滞于S期及G2/M期。5、免疫细胞化学染色：药物干预组细胞Bcl-2、Ki-67、Livin、Survivin和NF-κB表达降低，Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax的表达增加，对照组/EPA40μg/ml组、依托泊苷10μg/ml组/EPA40μg/ml+依托泊苷10μg/ml组、依托泊苷20μg/ml组/EPA40μg/ml+依托泊苷20μg/ml组相比较均有显著差异（P<0.05）。6、端粒酶：实验组端粒酶表达下降，EPA40μg/ml组/对照组（86.00±5.48vs94.00±5.48,P=0.0497），EPA40μg/ml+依托泊苷10μg/ml组/依托泊苷10μg/ml组（50.00±7.07vs64.00±11.40,P=0.0479）。7、模型小鼠：实验组模型小鼠肿瘤直径、腹水量及腹水中肿瘤细胞数均减少，照组/EPA组、依托泊苷组/EPA+依托泊苷组比较均有显著差异（P<0.05）。
　　结论：1、二十碳五烯酸具有抗肿瘤作用；2、二十碳五烯酸联合依托泊苷较单用依托泊苷抑制作用更强；3、二十碳五烯酸可以减少依托泊苷的剂量。

目录

声明

中英文缩略词表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

第三章结果

3.1 MTT法检测细胞增殖

3.2 人肺腺癌A-549细胞的形态学改变

3.3 活性氧（ROS）检测

3.4流式细胞术检测

3.5荧光显微镜观察

3.6免疫细胞化学染色结果

3.7 端粒酶检测

3.8 肿瘤模型小鼠观察

3.9 腹水模型小鼠观察

第四章 讨论

4.1 MTT法检测对肺腺癌A-549细胞的抑制作用

4.2 EPA联合依托泊苷诱导肺腺癌A-549细胞凋亡

4.3 细胞内活性氧水平与细胞凋亡

4.4 细胞增殖核抗原Ki-67的检测

4.5 细胞转录核因子NF-κB转导通路与细胞凋亡

4.6 Fas、Fas配体与肿瘤

4.7 Bcl-2家族与肿瘤

4.8 IAP家族与肿瘤

4.9 Caspase家族与肿瘤

4.10 端粒酶与肿瘤

4.11 动物模型的变化

第五章结论

参考文献

致谢

【综述】:二十碳五烯酸的抗肿瘤作用研究

附录A：攻读学位期间发表论文目录

附录B：附图