高浓度阿司匹林通过抑制NF-κB和p-38激活蛋白的活性降低小鼠RAW 264.7 细胞中LPS诱导的促炎细胞因子的表达

摘要

近年来的研究发现诸多疾病是由炎症反应引发或恶化，因此炎症反应在疾病中的重要角色受到更多的关注。越来越多的临床试验表明阿司匹林在代谢性、神经退行性等疾病中都有很好的防治效果，均与阿司匹林的抗炎作用有关。阿司匹林的作用机制一直受到广泛的关注和研究，但并不明确，存在争议。因此探究阿司匹林的抗炎机制有利于新药的开放和更好的临床应用，避免或减少副作用的发生。转录激活因子3（ATF-3）是含亮氨酸拉链结构的转录因子ATF/CREB家族中的成员，属于适应性反应基因,在大部分正常细胞中呈低浓度的稳态表达，可被一系列体内外损伤应激信号分子诱导表达。根据靶基因和细胞环境不同，ATF-3可激活或抑制相关基因表达。在细胞周期、免疫调节、肿瘤形成和细胞凋亡等过程中具有广泛的转录调节作用。近来的研究表明 ATF-3在免疫应激反应中的核心作用，负调节IL-6，TNF-α等促炎细胞因子。因此，我们探究阿司匹林的抗炎作用是否与ATF-3的表达有关。
　　本研究用脂多糖诱发小鼠 RAW264.7巨噬细胞发生炎症反应。通过RT-PCR测定ATF-3、IL-6、TNF-和IL-1β mRNA表达水平，用ELISA检测细胞培养液中IL-6和TNF-α蛋白质的变化。采用Western Blot方法检测ATF-3、TNF-α及NF-κB、MAPK信号途径的相关蛋白表达。用siRNA特定基因敲出技术检测ATF-3表达缺失时对炎症反应的影响。
　　本研究结果表明，阿司匹林抑制炎症因子IL-6、TNF-α及IL-1β的表达，同时诱导转录激活因子3（ATF-3）的表达，但ATF-3基因敲出并未逆转炎症因子的表达水平。说明阿司匹林的抗炎作用与ATF-3的高表达无关。高浓度的阿司匹林的可能通过抑制NF-κB和P-38 MAPK信号的传导发挥作用。

目录

声明

Introduction

Materials and methods

1. Agents

2. Cell culture and treatment

3. MTT assay for cell viability

4. RNA preparation and Reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR)

5. ELISA

6. Protein extraction and Western blot analysis

7. Transfection of siRNA

8. Statistical analysis

Results

The effects of aspirin on LPS-induced cytokine production in RAW 264.7 cells

The effects of aspirin on ATF-3 expression

The effects of ATF-3 siRNA on aspirin action

Aspirin inhibited LPS-induced NF-κB activation in RAW 264.7 cells

Aspirin inhibited LPS-induced p-p38 MAPK activation

The effects of p38 inhibitor SB203580 on LPS-induced cytokine release in RAW 264.7 cells

Discussion

Conclusions

参考文献

致谢

【Review】:The research progress of anti-inflammation mechanisms of aspirin