小鼠体细胞核移植胚胎端粒酶活性的测定

摘要

端粒酶作为生命的“生物钟”在胚胎发育的过程中起到了至关重要的作用，同时有保持染色体稳定性和细胞活性并能延长缩短的端粒。并且端粒酶对于研究体细胞克隆胚胎重编程有着重要意义。目的：为了解小鼠早期卵母细胞及体细胞核移植重构胚（NT）早期端粒酶活性的变化特点，本研究对小鼠卵母细胞和体细胞核移植重构胚2-细胞，4-细胞，8-细胞，桑葚胚以及囊胚各阶段相对端粒酶活性变化规律。方法：依据PCR产物进行电泳，利用端粒酶重复序列扩增法（TRAP）-银染，电泳条带在成像系统下的光密度值，对总产品产量相对定量计算（TPG）。
　　结果：
　　1.阳性细胞对照标准条带中，相对端粒酶活性与细胞浓度呈正相关。
　　2.小鼠卵母细胞、体内受精胚胎及核移植胚胎各细胞期端粒酶检测为阳性。随胚胎分裂端粒酶活性呈上升趋势，在囊胚期达到最高。在体内受精胚胎中，合子期（1-cell）相对端粒酶活性较高。
　　3.核移植胚胎与体内受精胚胎比较在2-细胞相对端粒酶活性有差异（P<0.05），在4-细胞、8细胞、桑葚胚、囊胚阶段无明显差异（P>0.05）。
　　4.体内受精胚胎与核移植胚胎在各自胚胎发育过程中呈现相似的规律：2-细胞、4-细胞、8-细胞相对端粒酶活性差异不显著（P>0.05）。囊胚期相对端粒酶活性与各胚胎时期差异显著（P<0.05）。
　　5.胚胎的单卵裂球相对活性呈总下降趋势到囊胚达最低。胚胎2-细胞期差异显著（P<0.05）。
　　6.通过对体内受精胚胎与体细胞重构囊胚的胚胎时期计数，体内受精胚胎单卵裂球细胞数多于体细胞核移植胚胎的囊胚，二者呈显著性差异（P<0.05）。

目录

声明

第一章 前言

1.1 端粒的基本概念

1.2 端粒的延长和调节机制

1.3 端粒酶

1.4 端粒酶的基本功能

1.5 哺乳动物及克隆动物早期胚胎发育过程中的端粒酶活性变化及作用

1.6 端粒酶活性的检测方法

1.7 本研究目的及意义

第二章 实验部分

实验一 胚胎样品的收集及核移植胚胎的构建

实验二 小鼠卵母细胞及核移植胚胎早期胚胎端粒酶活性的测定

第三章 结果与分析

3.1 293阳性细胞对照标准品端粒酶活性TRAP-银染电泳检测

3.2 不同浓度标准品293细胞提取物端粒酶活性的定量曲线

3.3 小鼠卵母细胞及体内受精胚胎早期端粒酶活性 TRAP-银染电泳检测

3.4小鼠卵母细胞及核移植胚胎早期胚胎端粒酶活性TRAP-银染电泳检测

3.6 体内受精胚胎与核移植胚胎不同胚胎之间发育时期端粒酶活性比较

3.7 体内受精囊胚与体细胞核移植囊胚染色及计数比较

3.8 体内受精胚胎与体细胞核移植胚胎发育时期样本间单卵裂球端粒酶活性比较

3.9 体内受精胚胎与体细胞核移植胚胎之间不同胚胎发育时期端粒酶活性比较

第四章 讨 论

4.1克隆动物的端粒酶活性

4.2 小鼠核移植胚胎端粒酶活性比较

4.3 小鼠核移植胚胎单卵裂球端粒酶活性比较

第五章 结 论

致谢

参考文献