延边地区耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对喹诺酮和氨基糖苷类药物耐药基因型分布的分析

摘要

目的:
　　分析延边地区耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对喹诺酮和氨基糖苷类药物耐药基因型分布，检测其gyrA、parC突变情况，氨基糖苷类修饰酶和16s rRNA甲基化酶基因携带情况，探讨多重耐药鲍曼不动杆菌耐药机制，为有效指导临床治疗，控制医院感染提供理论依据，同时为多重耐药鲍曼不动杆菌的控制寻找新的线索。
　　方法:
　　收集延边大学附属医院2015年09月-2017年12月临床各科室分离出的鲍曼不动杆菌，共285株，通过BD全自动细菌鉴定药敏仪对临床分离株进行菌种鉴定和药敏试验，42℃细菌培养筛选鲍曼不动杆菌，EDTA协同实验鉴定细菌是否产金属酶，改良Hodge试验检测细菌是否产碳青霉烯酶;通过聚合酶链反应(PCR)检测喹诺酮类gyrA、parC基因并进行测序分析，氨基糖苷类修饰酶基因与16s rRNA甲基化酶基因携带情况;统计细菌药敏数据，分析鲍曼不动杆菌耐药率与分布情况。
　　结果:
　　1.细菌菌种初步鉴定:细菌鉴定药敏和42℃细菌培养鉴定鲍曼不动杆菌，285株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌EDTA试验均阴性，提示细菌不产金属酶。改良Hodge试验均阳性，提示细菌产碳青霉烯酶。
　　2.分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对临床常用几种抗生素耐药率分别为:左氧氟沙星为100％、阿米卡星70.2％、庆大霉素96.1％、头孢他啶100％、头孢吡肟98.2％、青霉素类100％，属多重耐药鲍曼不动杆菌。285株有76.5％来源于痰标本，74.4％来源于重症监护病房。
　　3.喹诺酮系列药物耐药基因检测结果:285株菌株均存在gyrA和parC基因，gyrA基因83位氨基酸均存在Ser-Leu的突变。另外71位和162位氨基酸分别存在Gly和Arg的同义突变。parC基因80位均存在Ser-Leu的突变。另外，52.3％的菌株在109位氨基酸存在脯氨酸的同义突变，47.7％的菌株在124位、126位氨基酸分别存在赖氨酸及色氨酸的同义突变。
　　4.氨基糖苷类药物耐药基因检测结果:16s rRNA中153株检测出armA基因，检出率为53.7％，未检测到rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE和npmA基因。氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰa、aac(6')-Ⅰb、aph(3')-Ⅰa的检出率分别为81(28.4％)、101(31.4％)、28(9.2％)。同一菌株常有多种耐药基因的合并存在。
　　结论:
　　1.延边大学附属医院鲍曼不动杆菌在重症监护病房中较为流行，应加强重症监护室鲍曼不动杆菌的控制。对碳青霉烯类、喹诺酮类、氨基糖苷类抗生素都有较高的耐药率，属多重耐药鲍曼不动杆菌，对多粘菌素较为敏感。
　　2.延边大学附属医院多重耐药鲍曼不动杆菌gyrA和parC突变率较高，为本院耐喹诺酮类抗生素的主要原因。16s rRNA以armA检出为主，氨基糖苷修饰酶的存在增加了细菌对氨基糖苷类药物的耐药性，同一耐药菌株可有多种耐药基因的同时存在，共同介导了细菌对氨基糖苷类药物的高度耐药。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 前言

2．1 研究对象

2．2 试剂和仪器

2．2．1 培养基和药敏纸片

2．2．2 PCR反应所需试剂

2．2．3 仪器

2．3 实验方法

2．3．1 临床标本来源鲍曼不动杆菌的收集

2．3．2 细菌的鉴定

2．3．3 药敏试验

2．3．4 改良Hodge试验鉴定细菌是否产碳青霉烯酶

2．3．5 EDTA协同试验鉴定细菌是否产金属酶

2．3．6 基因组提取和高通量测序

第三章 实验结果

3．1 药敏试验结果

3．2 MR-AB标本类型及科室分布

3．3 改良Hodge试验结果

3．4 EDTA协同实验结果

3．5 多重PCR基因的测序结果

3．5．1 喹诺酮系列gyrA和parC基因序列测序结果

3．5．2 氨基糖苷系列16s rRNA甲基化酶基因序列测序结果

3．5．3 氨基糖苷系列氨基糖苷修饰酶及16s rRNA耐药基因分布情况

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢

综述 鲍曼不动杆菌耐药机制与流行趋势

附录