G-CSF对大鼠脑出血局部脑组织中iNOS和COX2蛋白表达的影响

摘要

目的:
　　探讨G-CSF对大鼠脑出血局部脑组织中iNOS和COX2蛋白表达的影响。
　　方法:
　　取健康SD大鼠42只（8周龄雄性，体重250～300g）随机分为7组:0h组，1h组，6h组，12h组，24h组，3d组和7d组。每组各取6只大鼠，以自体血脑内注入法（右侧外囊，50ul）制作脑出血模型，分别于术后0h，1h，6h，12h，24h，3d，7d时用颈椎脱臼法处死大鼠后，迅速提取脑出血局部脑组织在-80℃冻存。实验在0-4℃环境下应用组织粉碎机及RIPA裂解液将冷冻脑组织裂解，提取蛋白质用Western blotting检测iNOS和COX2，β-actin在0h，1h，6h，12h，24h，3d，7d期间的表达变化规律。取健康SD大鼠60只（8周龄雄性，体重250～300g）随机分为5组:阴性对照组、阳性对照组(Hb)及小、中、大剂量G-CSF治疗组（25、50和75μg/kg）。自体血脑内注入法（右侧外囊，50ul）制作脑出血模型。G-CSF治疗组术后2h和14h，经皮下分次注射G-CSF（25、50和75μ g/kg），阴性对照组和阳性对照组以同样方法注入等量生理盐水。分别于术后24h及7d时用颈椎脱臼法处死大鼠后，迅速提取脑出血局部脑组织在-80℃冻存。实验在0-4℃环境下应用组织粉碎机及RIPA裂解液将冷冻脑组织裂解，提取蛋白质用Western blotting检测iNOS和COX2，β-actin蛋白质表达水平;不同浓度的G-CSF对大鼠脑出血周边组织中NF-κB的下游靶基因iNOS，COX2蛋白质表达水平的影响。
　　结果:
　　在大鼠脑出血模型中iNOS的表达量在12h开始升高，24h达到高峰，3d有所下降，而COX2在6h开始升高，24h达到高峰，3d、7d后基本消失。总之，COX2在脑出血后短时间内迅速上升，24小时后表达量显著降低;iNOS的表达量脑出血后12h明显增高，7d后仍高于正常组织。小剂量G-CSF处理后24h时，G-CSF组脑出血局部脑组织中iNOS和COX2表达量均高于对照组，但与Hb组相比，两者表达无显著性差异(p＞0.05);中和高剂量G-CSF处理组与Hb组相比，炎症因子iNOS和COX2的表达量有显著降低(p＜0.05)并显示浓度依赖效应。G-CSF药物处理后7d，与Hb组相比，iNOS表达只在中和高剂量组有显著减低(p＜0.05)，而COX2表达是在3种剂量治疗组中均有显著性统计学差异(p＜0.05)。
　　结论:
　　中、高浓度G-CSF（50和75μg/kg）可减低脑出血周边组织中炎症因子iNOS，COX2蛋白的表达。

目录

声明

摘要

中英文缩略词

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1实验动物

2．1．2 实验药品与试剂

2．1．3 实验仪器

2．2实验方法

2．2．1 实验动物分组及给药方法

2．2．2 大鼠脑出血模型的制备

2．2．3 Western Blot法检测脑出血局部组织中及iNOS及COX2蛋白表达

2．3 统计学方法

第三章 结果

3．1 G-CSF对脑出血局部脑组织中i NOS、COX2蛋白表达的影响

3．2 不同浓度G-CSF对脑出血24小时局部脑组织中i NOS、COX2蛋白表达的影

3．3 不同浓度G-CSF对脑出血7天时局部脑组织中i NOS、COX2蛋白表达的影

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢

综述 G-CSF的作用及近期研究进展