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【6h】

石蒜属植物cDNA文库构建与表达序列标签(EST)分析

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前言

1石蒜属植物概况

2石蒜属植物花型、花色变异特征

3石蒜属植物资源的开发利用

4研究目的及实验流程

第一章国内外研究进展

1基因文库

1.1基因组文库

1.2 cDNA文库

2自动DNA测序技术

2.1自动DNA测序原理(以ABI全自动DNA测序仪3100型为例)

2.2数据的收集与分析

3 EST技术及其应用

3.1 EST技术的原理

3.2 EST技术的形成与发展

3.2 EST技术的应用

3.3 EST研究的主要步骤

4生物信息学在EST研究中的应用

4.1生物信息学

4.2公共数据库

4.3生物信息学在EST数据分析中的应用

5植物开花相关基因研究

5.1植物成花机理

5.2花色调控机理

5.3花卉EST研究

6植物叶发育研究

6.1植物叶发育调控机理

6.2叶发育相关基因研究

第二章忽地笑野生型和突变型叶片cDNA文库构建与分析

1实验材料

1.1植物材料

1.2样品采集

1.3实验试剂与仪器设备

2方法

2.1忽地笑叶片总RNA提取

2.2 mRNA的分离

2.3 cDNA文库的构建

3结果与分析

3.1 RNA定量与质量

3.2 mRNA的定量与质量

3.3 cDNA大小片段的过柱分离

3.4文库滴度的测定

3.5 cDNA文库的片段大小

4讨论

4.1 RNA的稳定性

4.2 cDNA文库质量检测

4.3 cDNA文库用途

第三章忽地笑野生型和突变型叶片EST序列测定

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果与分析

2.1大规模质粒提取

2.2大规模序列测定

3讨论

3.1关于质粒提取

3.2关于测序

第四章石蒜属植物表达序列标签(EST)分析

1实验材料与方法

1.1分析材料

1.2生物信息学分析

2结果与分析

2.1有效EST的获得

2.2序列提交

2.3片段重叠群分析及基因表达丰度分析

2.4长筒石蒜花苞EST序列同源性比较分析

2.5忽地笑叶片野生型和突变型的EST序列同源性比较分析

3讨论

3.1连续重叠群与EST的聚类

3.2 EST与数据库同源性比较

参考文献

图版

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摘要

表达序列标签(Expressed sequence tags.ESTs)是一种快速地进行基因功能分析及发现新基因的有效方法.为了全面了解石蒜属植物的花苞和叶片的基因表达情况,该研究利用cDNA文库,对忽地笑野生型叶片与突变型叶片及长筒石蒜花苞EST序列进行了测定,并对获得的EST进行生物信息学分析,为全面了解忽地笑叶片突变的机理及长筒石蒜花型、花色变异的原因奠定了基因组学和分子生物学方面的研究基础.

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