组蛋白乙酰转移酶p300对人NBS1基因表达的影响及其分子机制研究

摘要

组蛋白的翻译后修饰所引起的染色质结构的重塑在真核生物基因表达调控中发挥着重要的作用。其中研究得最深入的是由组蛋白乙酰转移酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)催化的乙酰化反应。这两种酶通过对核心组蛋白尾部赖氨酸残基进行可逆的乙酰化修饰来调控转录的起始，并由此介导基因的激活或抑制。转录辅激活子p300/CBP是具有组蛋白乙酰转移酶活性的蛋白，能通过多种机制参与许多基因的转录调控过程。 Nijmegen breakage syndrome(NBS)是一种隐性遗传失调的疾病。患者具有免疫缺陷和高频的癌症发生率，小头，生长缓慢。NBS患者的细胞显示了对电离辐射的高敏感性，染色体不稳定，加速了端粒的缩短，细胞周期检验点异常。NBS1基因是在Nijmegenbreakage syndrome中突变的基因，患NBS的病人提高了癌症的易患性。 本论文旨在确定组蛋白乙酰化修饰是否参与NBS1基因的转录调控，并试图探讨其分子机制。细胞转染和荧光素酶报告基因分析结果显示，外源表达p300能提高NBS1启动子荧光素酶报告基因的转录活性。反转录PCR(RT-PCR)、Real-time RCR和westernblotting结果表明，乙酰转移酶p300提高了细胞内源NBS1基因mRNA和蛋白表达水平。p300能提高NBS1启动子处组蛋白H3的乙酰化水平。C-MYC可以提高NBS1启动子荧光素酶报告基因的活性，而且其启动子-493位点对NBS1基因的转录激活起重要作用。 本项研究初步探讨了NBS1基因转录调控的分子机制，为深入研究NBS1基因转录调控机制和NBS1相关疾病的研究奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分研究背景

一、NBS1基因及其转录调控机制的研究进展

(一)NBS1基因的发现

(二)NBS1基因的结构及其转录调控

(三)NBS1的功能及研究现状

二、组蛋白乙酰化修饰与真核生物基因的转录调控

(一)染色质重塑与转录调控

(二)组蛋白乙酰化修饰与转录调控

三、本论文研究的内容及意义

第二部分实验材料与方法

一、实验材料

(一)质粒

(二)蛋白质和抗体

(三)哺乳动物细胞系

(四)试剂

二、实验方法

Ⅰ.分子生物学试验方法

Ⅱ.细胞生物学实验方法

第三章实验结果与分析

一、重组质粒的构建及鉴定

(一)NBS1报告基因质粒的构建及鉴定

(二)点突变质粒的构建及鉴定

二、组蛋白乙酰转移酶p300在NBS1基因转录调控中的作用

(一)p300参与了NBS1基因的转录激活

(二)p300提高了内源NBS1基因的表达水平

(三)p300能增强NBS1基因启动子子处组蛋白H3的乙酰化水平

(四)NBS1启动子区-493位C-MYC结合位点在NBS1转录调控中发挥重要作用

(五)转录辅激活子p300和转录因子的作用

第四章讨论

一、组蛋白乙酰转移酶p300参与了NBS1基因的转控

二、转录辅因子和转录因子对NBS1基因转录激活的促进作用

三、转录辅因子和转录因子对NBS1基因转录激活的促进作用

第四章结论

参考文献

致谢