松木层孔菌胞外多糖结构和生物活性研究

摘要

松木层孔菌（Phellinus pini）隶属于担子菌亚门，层菌纲，非褶菌目，多孔菌科，针层孔菌属。本文通过液体发酵培养技术获得松木层孔菌发酵液。 松木层孔菌发酵液经乙醇沉淀，得到松木层孔菌胞外粗多糖CPPE，利用苯酚—硫酸法和凯氏定氮法测得该多糖的总糖含量和蛋白含量分别为33．56％和31．68％。 采用冻融分级、链霉蛋白酶和sevag法联合脱蛋白及Sepharose CL-6B凝胶层析等方法对CPPE进行纯化，得到级分PPE。PPE为淡黄色粉末，比旋光度为+21．3°，总糖含量为92．84％，HPLC检验PPE为单一峰，平均分子量为39kDa，单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其摩尔比为38．4：1．76：1。 采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化等化学分析方法及IR、GC、GC—MS、13C—NMR等仪器分析方法对PPE进行了结构分析。确定了PPE的重复结构单元。PPE的基本结构为：α—（1→2）—D—Manp构成主链，每8个糖残基构成一个重复结构单元，从Man的0-6分出支点连接侧链，α—（1→2）—D—Manp和α—（1→2，6）—D—Manp的摩尔比为0．78：1；侧链由α—（1→3）—D—Manp和α—（1→6）—D—Manp构成，其摩尔比为3．71：1；Man构成PPE的末端。 应用MTT法，初步考察了PPE对小鼠体外淋巴细胞增殖的影响。结果表明：PPE能促进小鼠脾淋巴细胞增殖，同时也可协同有丝分裂原ConA和LPS促进小鼠脾T、B淋巴细胞的增殖。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章引言

一、真菌多糖研究概述

二、真菌多糖的提取和纯化

2.1真菌多糖的提取

2.2真菌多糖的纯化

三、真菌多糖的结构及研究方法

3.1真菌多糖的结构

3.2真菌多糖结构分析方法

四、真菌多糖的生物活性

4.1抗肿瘤和提高免疫功能

4.2降血糖、降血脂功能

4.3抗病毒作用

4.4抗氧化作用

4.5抗炎保肝功能

五、本课题研究的目的和意义

第二章松木层孔菌胞外多糖的提取和纯化

一、材料与方法

1.1实验材料

1.2实验试剂与仪器

1.3松木层孔菌胞外多糖的提取

1.4 CPPE总糖含量、蛋白含量的测定

1.5胞外多糖的纯化

1.6胞外液纯多糖的理化性质研究

二、结果与讨论

三、结论

第三章松木层孔菌胞外多糖的结构研究

一、材料与方法

1.1试剂和仪器

1.2单糖组成分析

1.3红外光谱分析

1.4部分酸水解

1.5高碘酸氧化与Smith降解

1.6甲基化分析

1.713C核磁共振

二、结果与讨论

2.1单糖组成分析

2.2红外光谱分析

2.3部分酸水解

2.4高碘酸氧化和Smith降解

2.5甲基化分析

2.613C NMR分析

三、结论

第四章松木层孔菌胞外多糖的生物活性研究

一、材料与方法

1.1材料与试剂

1.2松木层孔菌胞外多糖对淋巴细胞的影响

1.3统计方法

二、结果与讨论

论文总结

参考文献

致 谢