p300通过组蛋白乙酰化修饰激活RASSF2基因表达并诱导胃癌细胞晚期凋亡

摘要

RASSF2是一个新发现的肿瘤抑制因子,是Ras相关信号通路中的负调控因子。很多证据表明,RASSF2与肿瘤的发生存在着密切的关联,在结肠癌、胃癌和鼻咽癌等癌变组织或肿瘤细胞中RASSF2是低表达的,但是在正常组织或细胞中RASSF2的表达却很高。有研究发现,RASSF2的低表达与DNA高甲基化相关。但是目前,有关RASSF2的抑癌分子机制仍所知甚少,而对于RASSF2基因表达调控的机制也了解不多。在本文中,我们发现组蛋白乙酰转移酶p300通过上调RASSF2的表达,抑制了胃癌细胞SGC—7901的增殖并对其可能的机制进行了深入的研究。我们的工作证实,过量表达p300能抑制胃癌细胞的增殖,并诱导细胞发生晚期凋亡；而这一过程可通过利用smallinterfering RNA(siRNA)降低RASSF2蛋白的表达水平而被逆转。染色质免疫沉淀(ChIP)实验证实,p300固有的乙酰转移酶活性在p300参与RASSF2的表达调控中是必需的；p300通过增强RASSF2启动子区域的组蛋白H3和H4的乙酰化水平促进RASSF2基因的启动子活性。而且p300和转录因子Sp1对RASSF2基因在启动子水平,mRNA水平及蛋白水平的表达具有协同激活的效果。针对Sp1和p300设计的siRNA能够通过部分地抑制Sp1和p300的表达而抑制RASSF2启动子的活性,并使RASSF2的mRNA和蛋白表达水平下降。ChIP的实验结果表明,转录因子Sp1能够促进p300被招募到RASSF2的启动子上,而过表达p300能够导致更多的转录因子Sp1与RASSF2启动子结合。我们推测,这可能与p300通过提高启动子处组蛋白H3和H4的乙酰化水平,使染色质结构变得更为松散有关。我们的研究工作将有助于更好的阐述RASSF2基因转录调控及其抑癌的分子机制,并为基于RASSF2的基因治疗提供一定的理论基础。

目录

文摘

英文文摘

第一部分 研究背景

一p300/CBP复合物的研究进展

(一)组蛋白乙酰转移酶的研究进展

(二)p300/CBP的结构和功能

(三)p300/CBP作用机制

(四)p300/CBP与Ras信号通路的关系

二RASSF2基因的研究进展

(一)RASSF基因家族

(二)RASSF2基因的结构

(三)RASSF2基因的生物学功能

(四)RASSF2启动子甲基化与基因沉默

三本论文研究的内容和意义

(一)立题依据

(二)本文的研究内容和意义

第二部分 实验材料与方法

一实验材料

(一)质粒

(二)报告基因质粒的构建

(三)蛋白和抗体

(四)哺乳动物细胞系

(五)试剂

二实验方法

Ⅰ、分子生物学试验方法

Ⅱ、细胞生物学实验方法

Ⅲ、统计分析

第三部分 实验结果与分析

(一)p300通过上调RASSF2表达诱导细胞晚期凋亡

(二)p300对RASSF2基因转录的激活作用

(三)p300提高RASSF2启动子处组蛋白H3和H4的乙酰化水平

(四)p300与Spl协同激活RASSF2基因表达

(五)P300与Spl在RASSF2基因表达调控过程中的相互作用关系

第四部分 讨论

主要结论和创新点

参考文献

致谢

在学期间公开发表论文及著作情况