睾丸酮丛毛单胞菌3β/17β-羟基类固醇脱氢酶的表达调控分析

摘要

甾体激素是环境中存在的一类重要污染物，甾体激素的生物型降解和降解基因的表达调控分析日渐受到科研工作者的重视。睾丸酮丛毛单胞菌是一种利用甾体激素作为碳源和能源的革兰氏阴性细菌。本文利用酶联吸附免疫实验、基因敲除技术、高效液相色谱、环化RT-PCR技术、反向PCR技术、质粒共转化技术等对睾丸酮丛毛单胞菌中3β/17β-羟基类固醇脱氢酶的诱导表达、功能进行分析，以及转录起始位点、表达调控机理进行研究。
　　在培养基中分别加入等量的17β-雌二醇、雌三醇、胆固醇、睾丸酮进行睾丸酮丛毛单胞菌的培养，ELISA结果揭示3β/17β-HSD受甾体激素诱导，尤其睾丸酮对3β/17β-HSD诱导效应显著，高于无甾体激素添加表达量的45％。
　　通过首次构建3β/17β-HSD基因缺失突变菌株研究发现:3β/17β-HSD对胆固醇、睾丸酮的利用起重要作用，3β/17β-HSD基因缺失突变菌株对胆固醇的降解功能丧失，对睾丸酮的利用效率降低95％以上;同时发现3β/17β-HSD对甾体激素作用靶点是C3上的羰基。
　　利用环化RT-PCR的方法研究发现3β/17β-HSD基因mRNA全长不唯一，但基因转录起始位点基本集中在基因上游-143bp的位置，可能与细菌自身的代谢机制相关。
　　LysR转录调控家族是一类转录调控因子。采用质粒共转化研究3β/17β-HSD基因上游一个未知LysR蛋白对3β/17β-HSD的转录表达调控研究发现:在无外源激素诱导条件下，含有LysR基因的菌株比不含LysR基因的菌株3β/17β-HSD的表达量提高24％;同时在含有LysR基因的菌株中3β/17β-HSD的表达量随甾体激素的种类不同而不同，但均低于无激素添加的表达量，分析认为该LysR蛋白对3β/17β-HSD起到正调控的作用。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 睾丸酮丛毛单胞菌甾体类激素降解相关基因的研究进展

1．2 研究目的及意义

1．3 研究策略及方法

第二章 甾体激素对β3／17β-HSD的诱导表达研究

2．1 材料

2．2 方法

2．3 结果

2．4 讨论

第三章 3β／17β-HSD的功能及作用靶点研究

3．1 材料

3．2 方法

3．3 结果

3．4 讨论

第四章 3β／17β-HSD转录起始位点及启动子预测

4．1 材料

4．2 方法

4．3 结果

4．4 讨论

第五章 LysR蛋白对3β／17β-HSD表达调控研究

5．1 材料

5．2 方法

5．3 结果

5．4 讨论

第六章 结论

致谢

参考文献