药物协同诱导肿瘤抑制基因SOCS-1在U266细胞中的重新表达

摘要

目的 探讨脱乙酰化酶抑制剂丁酸钠(sodium butyrate,SB)联合去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理人骨髓瘤细胞系U266诱导其高甲基化失活的SOCS-1基因重新表达的可能性以及对U266细胞生长和凋亡的影响.方法 通过单用或联用两种药物处理U266细胞后测定细胞生长曲线;流式细胞仪分析细胞周期的变化和细胞凋亡的状况;RT-PCR和Western blotting检测SOCS-1的表达水平.结果 单用5-Aza-CdR(0.5μmol/L)或SB(0.5mmol/L)均有抑制U266细胞生长的作用,两药联用有协同作用.单用5-Aza-CdR或SB对细胞G<,1>期无影响,联合用药时则有显著的G<,1>期阻滞,且出现亚G<,1>峰.单用SB不能诱导U266细胞SOCS-1的表达,单用5-Aza-CdR可诱导U266细胞SOCS-1重新表达;两药联用可明显增强SOCS-1的表达水平.结论 SB与5-Aza-CdR协同可显著诱导U266细胞因高甲基化失活的SOCS-1基因的重新表达,细胞阻滞在G<,1>期,生长受抑.

目录

文摘

英文文摘

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主要缩略词简表

前言

第一章材料与方法

1.1材料

1.1.1主要实验试剂

1.1.2主要实验仪器

1.1.3细胞株

1.2方法

1.2.1细胞培养及试验分组

1.2.2细胞生长曲线测定

1.2.3流式细胞仪检测细胞周期变化

1.2.4流式细胞仪检测细胞凋亡

1.2.5 RT-PCR检测SOCS-1基因mRNA的表达

1.2.6 Western blotting检测SOCS-1蛋白表达

1.3结果分析

第二章结果

2.1细胞生长抑制作用

2.2流式细胞仪细胞周期分析结果

2.3流式细胞仪检测细胞凋亡结果

2.4 RT-PCR结果

2.4.1 RNA抽提结果

2.4.2 PCR扩增结果

2.5 Western blotting结果

第三章讨论

结 论

参考文献

综 述一

综述二

致 谢

攻读学位期间主要的研究成果