聚乳酸顺铂磁性微球靶向治疗肺癌的实验研究

摘要

目的：自行制备抗肿瘤药物聚乳酸顺铂磁性微球(PLA-CDDP-MMS)，并对其特性进行检测，评价其体外药物缓释性与磁响应性，为肺癌综合靶向治疗提供实验材料，为下一步实验奠定基础。 方法：采用复乳溶剂挥发法制备包裹顺铂和纳米级Fe3O4磁粉的聚乳酸微球，将顺铂100mg、Fe3O4纳米磁粉50mg、加至浓度2.5％的聚乳酸二氯甲烷溶液4ml中，经超声乳化分散，加入分散相中，搅拌速度1500r.min-1，成型温度25℃。用光学显微镜，电子显微镜观察形态，测定粒径。用紫外分光光度仪测定载药量，原子吸收光谱仪测定释放率，外加磁场下观察磁响应性。 结论：聚乳酸顺铂磁性微球在体外具有较好的磁响应性和药物缓释性，可作为磁靶向抗肿瘤药物载体。 目的：验证自行制备的聚乳酸顺铂磁性微球在体外对人肺腺癌A549细胞的药物活性，和对裸鼠移植肺腺癌的抑制作用。 方法：1.采用MTT法分析聚乳酸顺铂磁性微球对人肺腺癌A549细胞体外的杀伤作用。设立试验组及对照组，试验组分别加入CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS悬液、PLA-MMS悬液。每种药物7个浓度，每个浓度做4个平行孔，酶标仪测光吸收度，根据每个浓度的吸光度值，算出相应的细胞抑制率(IR)。 2.计数细胞密度观察不同药物对人肺腺癌A549细胞生长曲线的影响：设立CDDP组、PLA-CDDP-MMS组、PLA-MMS组、对照组。从接种时间算起，分别在12h、24h，、48h、72h于倒置显微镜下用红细胞计数台采用盲法计数，至第3天结束。以培养时间(h)为横坐标、细胞密度(×104个/ml)为纵坐标，绘制培养细胞的生长曲线。 3.观察聚乳酸顺铂磁性微球对裸鼠移植肺腺癌的治疗效果：裸鼠左腋皮下接种人肺腺癌A549细胞，建立裸鼠移植肺腺癌模型，将荷瘤裸鼠分为3组(对照组、CDDP组、PLA-CDDP-MMS组)，观察肿瘤体积变化和肿瘤生长率、肿瘤抑制率(TIR)、肿瘤坏死程度、治疗后荷瘤裸鼠自然存活时间及生命延长率(ILS)。 结果1.MTT法结果显示在最底浓度0.04g/ml时，三组药物对人肺腺癌A549细胞的抑制率IR均较低，三组比较无明显差异(P＞0.05)；在0.08～2.0μg/mlCDDP组IR明显高于PLA-CDDP-MMS组，P＜0.05；在4.0～8.0μg/mlCDDP组与PLA-CDDP-MMS组IR无显著差异(P＞0.05)；在0.04～4.0μg/mlCDDP组与PLA-CDDP-MMS组药物对人肺腺癌A549细胞的抑制率IR均随浓度的增加而增加；但在4.0～8.0μg/ml随浓度的增加IR增加幅度不明显。PLA-MMS在0.2～40.0μg/ml浓度增加200倍，但细胞抑制率无显著增加。 2.细胞密度计数结果显示随着培养时间的延长，细胞数均有不同程度的增加，在72hCDDP组与对照组比，P＜0.001；PLA-CDDP-MMS组与对照组比，P＜0.01；CDDP组与PLA-CDDP-MMS组比，P＜0.05，说明含顺铂相同剂量时，前者对肺腺癌A549细胞生长曲线的影响更加明显；PLA-MMS组与对照组各时间点计数接近，说明其对肺腺癌A549细胞生长无明显影响。 3.荷瘤裸鼠治疗前各组肿瘤体积比较无明显差异，治疗后对照组肿瘤体积明显增大，差异有显著性(P＜0.001)；CDDP组治疗后体积也有增大，和治疗前比较差异有显著性(P＜0.01)；PLA-CDDP-MMS组治疗后体积稍有缩小，但和治疗前比较差异无显著性(P=0.061)；治疗后治疗组体积和对照组比较差异均有显著性(P＜0.01)；和CDDP组比较，PLA-CDDP-MMS组体积缩小明显，差异有显著性(P＜0.01)；CDDP组TIR为22.4％，PLA-CDDP-MMS组为64.6％，与CDDP组比P＜0.01。病理组织学观察：对照组肿瘤细胞生长活跃，CDDP组以中度坏死为主；PLA-CDDP-MMS组以重度坏死为主。PLA-CDDP-MMS组存活时间明显延长，平均(45.6±5.8)天；而CDDP组平均存活时间(26.7±2.3)天，和对照组(23.3±3.5)天比无显著性差异，P=0.36。 结论：1.本实验制备的聚乳酸顺铂磁性微球在体外对人肺腺癌A549细胞有抑制作用，并存在浓度依赖关系； 2.本实验制备的聚乳酸顺铂磁性微球对裸鼠移植肺腺癌有显著抑制作用，能使荷瘤裸鼠平均生存时间明显延长。 目的：1.研究PLA-CDDP-MMS在大鼠体内的药物缓释性和外加磁场作用下对大鼠肺组织的靶向性； 2.比较肺动脉灌注PLA-CDDP-MMS与灌注CDDP游离药物、灌注CDDP并结扎肺动脉时药物动力学变化。 方法：1.经大鼠尾静脉注入CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS悬液，测定在不同时间点CDDP组、靶向组和非靶向组大鼠体内药物动力学变化，及靶肺铁原子含量。并比较CDDP组和微球组在用药后168h血常规变化；并对实验动物的肺、肾、肝行组织学检查，了解栓塞情况；2.经选择性肺动脉灌注CDDP溶液、PLA-CDDP-MMS悬液，测定CDDP灌注组、CDDP灌注+结扎组、及PLA-CDDP-MMS灌注+磁场组在用药后2h、24h大鼠体内药物动力学变化。 结论1.PLA-CDDP-MMS在大鼠体内具有磁靶向性和药物缓释性；2.静脉使用PLA-CDDP-MMS和相同剂量的游离CDDP比较，全身毒性降低； 3.经选择性肺动脉灌注PLA-CDDP-MMS悬液外加磁场与CDDP灌注组、CDDP灌注结扎组比较，能显著增加靶肺组织中顺铂含量，同时显著降底血液、肝、肾组织中顺铂含量

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

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背景

第一部分聚乳酸顺铂磁性微球的制备及特性检测

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

第二部分聚乳酸顺铂磁性微球对人肺腺癌A549细胞体外毒性及对裸鼠移植肺腺癌的抑制作用

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

结论

第三部分聚乳酸顺铂磁性微球在大鼠体内的肺靶向性和药物缓释性

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

结论

附图

参考文献

综述：恶性肿瘤的磁靶向综合治疗

一、靶向治疗及其分类

二、磁靶向化疗

三、磁靶向热疗

四、磁控血管内磁性微球栓塞

总结和展望

参考文献

致谢

攻读学位期间主要研究成果