大鼠骨髓细胞CD34βmCD90亚群体外培养诱导分化和肝内移植的研究

摘要

肝纤维化是肝脏疾病转变为肝硬化、肝癌的一个极其重要的过程。当肝病发展到纤维化期，即使病因被消除和／或得到了及时治疗，仍基本呈现一种不可逆的病理改变。所以如能在肝纤维化时找到一种较好的治疗方法，无疑对阻止其继续进展和改善预后有非常重要的意义。 近年来，骨髓造血干细胞(HSCs)的可塑性研究取得了巨大进展，HSCs移植后在体内能分化成具有白蛋白分泌功能的肝细胞，为肝细胞移植治疗肝疾病提供了新的供体来源。与成熟肝细胞相比，HSCs具备较高的增殖能力及较低的免疫原性，作为肝细胞移植的供体来源有一定优势，临床应用前景非常突出。通过移植少量细胞来实现受体肝细胞结构和功能的替代，使阻断肝纤维化向肝硬化、肝癌转化成为现实。 HSCs没有明确的形态学特征，都表现为淋巴细胞样的单个核母细胞，CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>表型为HSCs抗原标志被广泛接受，利用免疫磁性分离方法(MACS)可从骨髓细胞中分离出CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞。本试验分离纯化出肝纤维化SD大鼠骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞在体外用特异性的生长因子进行诱导分化培养，同时将标记的CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞将移植入同种模型大鼠肝内，观察体内外CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<+>细胞的CD34<'+>β<,2>m<'->CD9<'+>细胞分化状况及功能表达。以检验骨髓细胞移植的效果，并探讨骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞治疗肝纤维化的可能机制。 第1章：大鼠骨髓细胞CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>亚群体外培养诱导分化 目的：在体外用HGF+EGF诱导骨髓CD34<'+>β<,2>m<'-> CD90<'+>细胞向成熟肝细胞转化。 方法：1．四氯化碳皮下注射建立大鼠肝纤维化模型，磁式细胞分离法取骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞，流式细胞仪检测；2．DMEM培养细胞，HGF+EGF诱导分化；3．透射电镜和扫描电镜观察细胞的超微结构；4．免疫荧光显微镜、免疫细胞化学和RT-PCR检测AFP、白蛋白和CK-18的表达；5．ELISA法检测培养上清白蛋白浓度，PAS染色法检测糖原的合成。 结论：1．大鼠肝纤维化可能促进骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞的增殖；2．CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞经HGF+EGF+SCF诱导分化培养后，在形态和功能上有逐渐向成熟肝细胞转化的趋势。 第2章：大鼠骨髓细胞CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>亚群肝内移植的研究 目的：观察骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞在受体大鼠纤维化肝内的定居、生长以及对受体肝的影响。 方法：1．将雄性肝纤维化大鼠的骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞甩PKH26-GL标记后，从门静脉注射到预先经放疗的同种模型雌性大鼠肝内；2．PCR检测雌鼠血清Y染色体的表达，荧光显微镜检测PKH26-GL标记的骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞在受体肝内的分布；3．病理学检查移植骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞后大鼠肝纤维化组织形态学改变；4．免疫组化检测肝内白蛋白、α-SMA的表达，放免法测定受体血清层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)的水平，斑点杂交检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。 结论：1．大鼠骨髓CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞自体移植入纤维化肝后，可能定居并有一定程度的增殖；2．大鼠移植(CD34<'+>β<,2>m<'->CD90<'+>细胞后，受体肝纤维化程度有减轻的趋势。

目录

文摘

英文文摘

第1章大鼠骨髓细胞亚群CD34+β2m-CD90+体外培养诱导分化

第2章大鼠骨髓细胞亚群CD34+β2m-CD90+肝内移植的研究

综述 骨髓造血干细胞横向分化肝干细胞的可塑性

致谢

攻读博士学位期间的主要研究成果