实验性铅性肾病肾脏纤维化发病机理及其防治的研究

摘要

第一章铅对大鼠肾脏纤维化相关因子表达的影响研究背景：铅是一种常见的工业毒物和环境污染物，铅性肾病为中毒职业人群死亡原因的第二位。研究资料显示铅性肾病患者中几乎都有肾脏纤维化的改变。铅性肾病早期可完全治愈，而一旦出现肾小球硬化、肾间质纤维化甚至肾功能衰竭，病变将不可逆转。但到目前为止铅性肾病的机理尚不清楚，我国对本病的基础研究报道较少，国外研究主要集中于探讨铅亲合蛋白及核包涵体与肾损害的关系，对铅导致肾脏纤维化的分子机理，国内外目前尚无相关报道。 目的：从蛋白质和分子水平观察铅对大鼠肾脏纤维化相关因子核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。 方法：SD大鼠48只适应性饲养1周，采用随机原则将动物分为6组，每组8只，Ac、Bc、Cc组为正常对照组，分别予蒸馏水喂饮1月、2月、3月；A、B、C为染铅组，分别给O.5％的醋酸铅喂饮1月、2月、3月。实验结束时称肾重、体重的变化；原子吸收光谱石墨炉法测量血铅、肾铅的含量；电子显微镜观察肾脏的超微病理改变；应用免疫组化的方法检测肾组织NF-κB、TGF-β及FN蛋白的表达情况；用RT-PCR的方法检测肾组织中NF-KB、TGF-B及FN mRNA的表达；用ELISA的方法检测血清IFN-γ的含量。 结论: 1.铅能促进FN蛋白和mRNA在肾组织中的表达。提示染铅2月后肾组织即启动了纤维化的早期环节。 2.铅能促进NF-κB蛋白和mRNA在肾组织中的表达,而NF-κB可促进肾脏纤维化,提示铅所导致的肾脏纤维化与NF-KB有关。 3.铅能促进TGF-βmRNA在肾组织中的表达,提示TGF-β也参与了铅性肾病肾脏纤维化的发病过程,但铅对该因子为一迟发性影 响。 4.铅可降低血清IFN-γ含量。而IFN-γ对肾脏纤维化有保护作用,提示铅所导致的肾脏纤维化与IFN-γ的降低有关。 第二章硫胺素和碘化钾对实验性铅性肾病的治疗作用及对纤维化相关因子表达的影响 研究背景：目前对于铅中毒的治疗主要是驱铅治疗。常见的驱铅药物是螯合剂，但使用螯和剂有许多副作用。首先，它可导致超敏反应、白细胞减少、微量元素的丢失及肾功能衰竭等；其次，螯和剂仅供静脉注射，且有局部刺激和产生过敏等不良反应，需脱产定时注射，不便作预防性用药；第三，大部分药物不能进入细胞内，导致细胞内的排铅特别是软组织中的铅排出困难，近年对铅作用的分子机制提示，铅的毒性作用的靶位点在细胞分子上，如从分子水平给予药物治疗，预期可达到治本和长期防治的良好效果。 目的：首先观察硫胺素和碘化钾对铅性肾病的治疗作用，进而从蛋白质和分子水平观察他们对纤维化相关因子核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子．B(TGF-β)、干扰素-Y(IFN-γ)及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。 方法：SD大鼠96只适应性饲养1周，随机分为12组， 每组8只，Ac、Bc、Cc组为正常对照组，分别予蒸馏水喂饮1月、2月、3月；A<,pb.、B<,pb>、C<,pb>为染铅组，分别给予O.5％的醋酸铅喂饮1月、2月、3月；A<,vb>、B、C<,vb>为硫胺素组，在给予O.5％的醋酸铅喂饮的同时予硫胺素3mg／100g体重，注射用水稀释灌胃qd，时间分别为1月、2月、3月；A<,KI>、B<,KI>、C<,KI>为碘化钾组，在给予O.5％的醋酸铅喂饮的同时予碘化钾3mg／100g体重，注射用水稀释灌胃qd，时间分别为1月、2月、3月。实验结束时称肾重、体重变化；原子吸收光谱石墨炉法测量血铅、肾铅含量；电子显微镜观察肾脏超微病理改变；用免疫组化的方法检测肾组织NF-к B、TGF-β及FN蛋白的表达，用RT-PCR的方法检测肾组织NF-к B、TGF-β及FN mRNA的表达，用ELISA的方法检测血清IFN-γ含量。 结论： 1.硫胺素和碘化钾能拮抗铅对大鼠生长发育的影响，并有驱铅、改善铅性肾病超微结构的作用，两者效果相当； 2．硫胺素和碘化钾治疗均可延缓铅所导致的肾脏纤维化的早期启动，且两者的效果相当，但机制却有所不同； 3．硫胺素的保护作用可能与抑制NF-κB的活性有关；碘化钾也有类似的作用，但与硫胺素相比，其作用相对较弱。 4．硫胺素和碘化钾在本实验中，对TGF-β的影响均不大。 5．硫胺素的治疗作用可能是通过抑制体内铅所导致的IFN-γ水平的降低，增强其对肾脏纤维化的保护作用，间接抑制肾脏纤维化而实现的；碘化钾似乎也有类似的作用，但结果并无统计学意义，说明硫胺素的作用优于碘化钾。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一章铅对大鼠肾脏纤维化相关因子表达的影响

第二章碘化钾和硫胺素对实验性铅性肾病的治疗作用及对肾脏纤维化相关因子表达的影响表达的影响

参考文献

综述慢性铅性肾病防治的研究进展

致谢

攻读学位期间主要的研究成果