香烟提取物对人内皮细胞MMP-9和TIMP-1分泌的影响

摘要

目的:研究香烟提取物(cigerettesmokingextract,CSE)对体外培养的人脐静脉内皮细胞胞产生基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)及其组织抑制因子(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1)的影响. 方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV-304),取指数生长期细胞用于实验。去过滤嘴燃烧的香烟由负压吸引装置连续抽吸,吸入烟雾经三通另一个出口入PBS液体中制成悬液,过滤除菌,并稀释成含不同浓度的CSE的DMEM培养基,1h内用于实验。用不同浓度的CSE(0,2.5[％],5[％],10[％])干预内皮细胞,根据干预浓度的不同,将实验分四组:1、对照组;2、2.5[％]CSE干预组;3、5[％]CSE干预组;4、10[％]CSE干预组。10[％]CSE干预ECV-304细胞0h,3h,6h,9h,12h,24h,48h,收集培养上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测上清中MMP-9、TIMP-I的浓度;收集不同CSE浓度干预24h后的培养细胞,提取细胞中的蛋白,Bradford法测定蛋白浓度,WesternBlot法检测MMP-9、TIMP-1蛋白表达。 结果:对照组MMP-9浓度为1.66±0.1ng/ml,2.5[％]CSE干预组、5[％]CSE干预组、10[％]CSE干预组的MMP-9浓度分别为2.79±0.2ng/ml、4.70±0.5ng/ml、7.43±0.6ng/ml。不同浓度CSE干预组和对照组比较,MMP-9浓度增高,具有统计学意义(P<0.01),各干预组组间两两比较,也具有统计学意义(P<0.01),MMP-9浓度增高与CSE呈浓度依赖性；10％CSE干预细胞0h，3h，6h，9h，12h，24h，48h后，培养上清MMP-9浓度分别为1.70±0.3ng／ml，2.72±0.3ng／ml，3.04±0.2ng／ml，4.12±0.4ng／ml，5.24±0.2ng／ml，7.43±0.6ng／ml，8.23±0.6ng／ml，10％CSE干预内皮细胞3h后，MMP-9浓度开始升高，随着时间的延长MMP-9浓度逐渐升高，不同时间点与Oh比较均具有统计学意义(P均<0.01)。对照组TIMP-1浓度为2.15±0.3ng／ml，2.5％CSE干预组、-5％CSE干预组、10％CSE干预组的TIMP-1浓度分别为5.68±0.5ng／ml、10.31±0.7ng／ml、13.65±0.6ng／ml。不同浓度CSE干预组和对照组比较，TIMP-1浓度增高，有统计学意义(P<0.01)，各干预组组间两两比较，也具有统计学意义(P<0.01)；10％CSE干预细胞0h，3h，6h，9h，12h，24h，48h后，培养上清TIMP-1浓度分别为2.43±0.4ng／ml，3.53±0.5ng／ml，4.73±0.5ng／ml，6.47±0.4ng／ml，9.11±0.5ng／ml，13.65±0.6ng／ml，152±0.9ng／ml，10％CSE干预内皮细胞3h后，TIMP-1浓度开始升高，随着时间的延长TIMP-1浓度逐渐升高，不同时间点与Oh比较均具有统计学意义(P<0.01)。对照组MMP-9／TIMP-1为0.79±0.06，2.5％CSE干预组、5％CSE干预组、10％CSE干预组MMP-9／TIMP-1分别为0.49±0.02、0.46±0.03、0.55±0.02，各干预组和对照组比较，MMP-9和TIMP-1的浓度比值降低，具有统计学意义(P<0.01)，但各干预组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。10％CSE干预细胞不同时间后，MMP-9／TIMP-1呈先上升后下降的动态变化过程。WesternBlot显示，对照组MMP-9蛋白表达很少，不同浓度CSE干预培养细胞24h后MMP-9蛋白表达增高，且随着CSE浓度的增高，MMP-9蛋白表达也逐渐增高；对照组TIMP-1蛋白有少量表达，不同浓度CSE干预培养细胞24h后TIMP-1蛋白表达增高，且随着CSE浓度的增高，TIMP-1蛋白表达也逐渐增高。 结论：1、CSE能诱导人脐静脉内皮细胞产生MMP-9水平增加，人脐静脉内皮细胞产生MMP-9与CSE呈浓度时间依赖关系。2、CSE能诱导人脐静脉内皮细胞产生TIMP-1水平增加，人脐静脉内皮细胞产生TIMP-1与CSE呈浓度时间依赖关系。3、CSE能引起人脐静脉内皮细胞产生MMP-9／TIMP-1比值失衡。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

第一章前言

第二章材料、对象与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

第六章参考文献

综述 基质金属蛋白酶-9与肺部疾病的关系

致谢