ACE-siRNA对人脐静脉内皮细胞MMP-9/TIMP-1及ET-1/NO表达的影响

摘要

目的观察血管紧张素转化酶-小分子干扰RNA(ACE-siRNA)对原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、一氧化氮(NO)、血管收缩因子内皮素-1(ET-1)表达的影响。方法培养原代HUVECs,脂质体转染ACE-siRNA入细胞,观察其对ACE mRNA和蛋白表达的影响。内皮细胞分为正常对照组,血管紧张素2刺激组(AngⅡ组)及AngⅡ刺激联合ACE-siRNA转染组(AngⅡ+siRNA组),采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组MMP-9及TIMP-1 mRNA表达变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组MMP-9及TIMP蛋白表达;硝酸还原酶法检测NO浓度,酶联免疫吸附试验检测ET-1浓度。结果ACE-siRNA转染后48 h有效抑制ACE mRNA和蛋白表达(P<0.05)。与正常对照组比较,AngⅡ组MMP-9 mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度增加,NO浓度降低(P<0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+siRNA组MMP-9mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度下降,NO表达增加(P<0.05)。结论特异性ACE-siRNA可有效沉默ACE表达,增加NO释放,减少ET-1表达,下调MMP-9/TIMP-1比例。