槲皮素脂质体纳米粒对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用

摘要

目的:比较槲皮素脂质体纳米粒化后对肝癌HepG2细胞的抑制作用是否优于纯槲皮素。 方法: 1．以适量槲皮素为原料，少量PEG400与5[％]葡萄糖溶液为试剂，用1000ml茄形烧瓶、旋转蒸发器为仪器制得槲皮素混悬液。以磷脂、胆固醇、槲皮素及十八胺/磷脂酰丝氨酸为原料采用薄膜蒸发--高压均质法分别制备得槲皮素脂质体纳米粒与空白脂质体纳米粒。 2．以HepG2细胞株为原料，PBS液冲洗，胰酶消化，培养液(高糖DMEM粉+双蒸水)营养，37℃CO<,2>培养箱中培养，得梭形，生长状态良好，光亮性好的 HepG2 细胞。 3．HepG2细胞按每孔5000个/1.5 m1接种到24孔扳中，注入1m1琼脂悬液，分别加入7.625mg/L槲皮素，槲皮素纳米粒，空白纳米粒(每孔25μ1)，以HepG2细胞为对照(加入PBS每孔25μ1)，培养7～10天，肉眼镜下观察细胞集落，分析槲皮素纳米粒对HepG2肝癌细胞的抑制情况。 4．HepG2细胞按每孔10000个/150μl接种于96孔扳，分别加入不同浓度的槲皮素，槲皮素纳米粒，空白纳米粒进行培养(每孔50μ1)，以}tepG2细胞为对照(加入PBS每孔50μ1)，24小时，48小时后，用MTT观察细胞生长状况，分析抑制情 况。 5．HepG2细胞按每孔5×10<'6>/9m1个接种在4个50ml培养瓶中，分别加入76.25mg/L槲皮素，空白脂质体纳米粒，槲皮素脂质体纳米粒，48小时后裂解提取DNA，分别进行DNA．电泳。 结果: 1．槲皮素纳米脂质体粒径为133±25nm，载药量为5.08±0.17mg／ml，包封率为90.2±1.57％。空白纳米脂质体 粒径约为164±20nm。 2．HepG2细胞生长的状态良好，数量较多，梭形，光亮性好。 3．通过软琼脂集落培养发现(肉眼镜下观察)，加入PBS细胞集落约207个，加入空白脂质体细胞集落L约153个，加入槲 皮素集落约132个，加入槲皮素脂质体纳米粒集落约86个。 4．通过MTT发现：24小时光密度值：同浓度的槲皮素脂质体纳米粒与槲皮素，空白脂质体纳米粒比较，差异并不明显，与5-Fu比较，只有浓度3，有明显差异(较同浓度的5-Fu大)。48小时光密度值：同浓度的槲皮素脂质体纳米粒明显较槲皮素，空白脂质体纳米粒小，与5-Fu比较，明显较大。 5．通过DNA电泳发现大分子DNA，纯槲皮素，空白脂质体纳米粒，槲皮素脂质体纳米粒较正常对照组多，而小分子DNA纯槲皮素，空白脂质体纳米粒，槲皮素脂质体纳米粒较正常对照组少。 结论: 进一步证实了槲皮素对HepG2肝癌细胞的抑制作用。脂质体载体本身也有抑制HepG2细胞的作用(其机理待进一步研究)。在所使用的浓度范围内，槲皮素脂质体纳米粒对体外肝癌HepG2细胞的抑制作用更优于纯槲皮素。槲皮素，空白脂质体纳米粒，槲皮素脂质体纳米粒对肝癌HepG2细胞的抑制作用并不是通过破坏观察到的DNA而达到的。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一章方案和技术路线

第二章材料和方法

第三章实验结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

纳米中药及其脂质体，聚合物载体

致谢

攻读硕士学位期间获得的课题及发表的文章