应用噬菌体展示肽库筛选特异性结合KT-1/A3细胞的肽配体

摘要

慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是一种发病率很高的血液系统恶性肿瘤，干扰素-α(IFN—α)是治疗CML的最有效制剂之一。利用IFN—α治疗白血病，可使70[％]～80[％]CML病人得到血液学缓解，20[％]～25[％]的患者获得完全的细胞遗传学缓解，但显然并不是对所有的患者均有效，干扰素耐药比率很高。本研究通过利用噬菌体展示技术，筛选特异结合对干扰素敏感的白血病细胞株的肽配体，以此寻找干扰素敏感株的细胞特异性表达的膜表面分子，探讨IFN—α对CML细胞的抑制效应，以及IFN—α抗性产生的可能机制。 目的： 利用噬菌体展示技术筛选特异结合对干扰素敏感的白血病细胞KT-1/A3的肽配体，以此寻找干扰素敏感株细胞特异性表达的膜表面分子。 方法： 利用对干扰素敏感的慢性髓系白血病细胞株KT-1/A3作为靶细胞、干扰素不敏感株KT-1/A3R作为预吸附细胞，正负筛选噬菌体展示肽库，随机挑选噬菌体肽单克隆，通过细胞ELISA、流式细胞学检测验证噬菌体肽结合KT-I/A3细胞的特异性，测序后进行生物信息学分析；并通过台盼蓝拒染实验和MTT实验验证噬菌体肽对IFN-α 抑制KT一1／A3细胞生长作用的影响。 结果： 经4轮筛选的噬茵体库中得到4个克隆，仅识别KT-1／A3细胞， 与KT-l／A3R、K562和HL60等白血病细胞结合较弱，其中1个单克 隆噬菌体A410可直接减弱IFN-α对KT—l／A3细胞的生长抑制作用。 测序得到的1个克隆插入七肽为KLWVIPQ，和结合受体的E3泛素 蛋白质连接酶具有极高的同源性，提示泛素一蛋白酶体系统可能参与 白血病对干扰素敏感性的维持。 结论： 采用噬菌体展示技术，肽库用相似细胞株预吸附后，再与靶细胞 结合，可以得到靶细胞株的特异性肽配体，为相应的细胞表面蛋白质 相互作用研究提供线索；为恶性肿瘤的早期诊断、鉴别诊断及靶向治 疗开辟新的研究思路。

目录

文摘

英文文摘

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

主要英文缩写注解

一 前言

二 材料和方法

三 结果

四 讨论

五 结论

六进一步研究设想

参考文献

筛选与慢性粒细胞白血病细胞特异性结合的七肽及七肽对白血病细胞生物学行为的影响初探

肿瘤抑制性多肽

致谢

研究生期间的成绩