抗TNFR1中和抗体治疗急性肝衰竭的实验研究

摘要

目的: 通过检测小鼠血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α、ALT、AST水平，肝组织的病理改变，肝细胞凋亡程度及肝脏肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor-1，TNFR1)mRNA的表达水平的改变，研究TNF-α在小鼠急性肝衰竭发生过程中的作用，观察抗TNFR1中和抗体对小鼠肝损伤的作用和肝细胞TNFRlmRNA表达的影响，探讨抗TNFR1中和抗体用于治疗急性肝衰竭(Actue Hepatic Failare，AHF)的可能性。 方法: 采用雄性昆明小鼠共72只,随机分成3组,按以下要求处理：模型组为TNF-α+D-氨基半乳糖(D-Ga1N),治疗组为抗TNFR1中和抗体。+D-GaIN=TNF-α，对照组为生理盐水。以TNF-α10μg/kg+D-GaIN 900mg/kg建立肝衰竭动物模型，给予抗TNFR1中和抗体250μg/kg进行干预。分别于造模后4h、8h和12h处死小鼠，采集血清，-20℃冻存待测TNF-α、ALT、AST，收集肝组织标本分别于4[％]的多聚甲醛中固定和液氮中保存。分别采用全自动生化法检测ALT和AST水平、ELISA检测TNF-α水平法、HE染色检查肝脏组织病理变化、脱氧核糖核昔酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术检测肝细胞的凋亡程度及RT-PCR等方法肝细胞TNFR1的表达情况。 结果: 模型组血清TNF-α及ALT、AST水平明显高于治疗组(P<0.05)，且血清ALT、AST水平与TNF-α水平正相关(r<，(ALT)>0.5711, P<0.05、r<，(AST)>0.5983，P<0.05)；模型组肝组织TUNEL染色可见大量凋亡细胞，HE染色有明显的肝细胞坏死和炎性细胞浸润，而治疗组肝细胞凋亡和坏死明显减轻，两者比较(P<0.05)；各试验组肝细胞TNFRl mRNA的表达均较对照组升高(P<0.05)，并与血清TNF-α平正相关(r=0.6899，P<0.05)，治疗组TNFRl mRNA的表达较模型组明显下降(P<0.05)。 结论： 1、TNF-α10μg／kg和D-GalN900mg／kg联合用药成功构建了AHF动物模型。 2、TNF-α是诱导小鼠急性肝衰竭的重要介质，3、抗TNFRl中和抗体对肝损伤具有保护作用。 4、TNF-α能上调TNFRlmRNA的表达，抗TNFRl中和抗体能抑制TNF-α诱导的TNFRlmRNA表达。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词简表

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第一章前言

第二章TNF-α/TNFR1对小鼠肝损伤的作用

第三章抗TNFR1中和抗体对急性肝衰竭小鼠肝细胞的保护作用

第四章抗TNFR1中和抗体与肝细胞TNFR1mRNA表达的关系

第五章讨论

第六章结论

参考文献

综述 肝细胞凋亡相关因子的研究进展

致谢