稳定高表达hGRβ的人胚肾上皮细胞系的建立及其应答LPS和地塞米松的变化

摘要

目的：通过病毒感染HEK293细胞系构建稳定高表达人糖皮质激素受体β的人胚肾上皮细胞系，并比较其对脂多糖增殖诱导作用及地塞米松抑制增殖作用敏感性的变化，以考察hGRβ在细胞炎性增殖发生及治疗处理中的效应，为深入探讨hGRβ在炎症中的生物学意义提供资料。 方法：通过重组hGRβ的逆转录病毒颗粒感染HEK293细胞获得克隆化hGRβ-HEK293细胞；随后PCR扩增源于重组载体的neo和hGRβ基因，并行酶切和序列分析鉴定，同时以半定量RT-PCR确认重组基因的自主表达；最后采用流式细胞分析和MTT比色法检测脂多糖刺激的细胞炎性增殖变化及地塞米松抑制炎症细胞增殖的效应。 结果：PCR扩增及序列分析表明所构建hGRβ-HEK293细胞基因组含有重组hGRβ基因；半定量RT-PCR结果显示其hGRβ RNA水平与对照细胞系比较差异显著（P<0.05）；其具有应答低水平LPS刺激和应答高水平LPS、表现细胞增殖而非凋亡的特点，同时地塞米松对其增殖抑制率显著低于对照HEK293细胞。 结论：成功构建了稳定高表达hGRβ的人胚肾上皮细胞系，初步细胞学实验结果提示HEK293细胞内高hGRβ水平与高LPS炎性增殖应答关联，同时又降低其对糖皮质激素的敏感性，表现出对炎症发生敏感及抵抗治疗的双重效应。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：TABLE OF ABBREVIATIONS,缩略语简表

声明

Chapter 1 PREFACE

Chapter 2 MATERIALS AND METHODS

2.1 Materials

2.2 Methodology

Chapter 3 RESULTS

Chapter 4 DISCUSSION

Chapter 5 CONCLUSIONS AND RECOMMENDATIONS

REFERENCES

GIGSAW PUZZLE ON THE PHYSIOLOGICAL SIGNIFICANCE OF hGRβ

AKNOWLEDGEMENTS

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章 结论

进一步研究设想