白藜芦醇抑制兔实验性骨关节炎关节软骨细胞IL-1β表达的研究

摘要

目的：通过研究白藜芦醇干预兔实验性骨关节(Osteoarthritis,OA)炎动物模型后，关节软骨、滑膜细胞白细胞介素-1β合成的变化，探讨其治疗骨关节炎的作用机制。 方法：36只新西兰大白兔，随机抽取6只，作为正常对照组(A组)。其余30只参考Hulth介绍的方法，建造兔OA模型，术后4周，经X线和病理改变证实造模成功后，将造模动物随机分为：模型组(B组)、阳性药物对照组(C组)(双醋瑞因1mg·(kg·d)<'-1>)、受试药物高剂量组(D1组)(白藜芦醇120 mg·(kg·d)<'-1>)、中剂量组(D2组)(白藜芦醇60 mg·(kg·d)<'-1>)、低剂量组(D3组)(白藜芦醇30 mg·(kg·d)<'-1>)，每组6只。并按设定剂量每日灌胃给药，连续给药6周后，处死动物，切取股骨内髁软骨标本，脱水，石蜡包埋后切片，用HE染色，采用双盲法在光镜下按Wakitani法对关节软骨病理改变进行组织形态学评分，用免疫组化法观察软骨细胞中IL-1β阳性细胞来检测其IL-1β水平，并且进一步对其抑制IL-1β的强度与其相应的关节病理改变的wakitani法改变的组织形态学评分指数做相关分析。 结果：①造模动物的关节病理改变符合OA的病理改变，其Wakitani法形态学评分指数为11.67±0.52， IL-1β阳性细胞检出率为(49.06±5.45)﹪，而正常动物分别为0、(2.94±0.90)﹪，其差异具有高度显著性，p<0.01；②阳性对照药物(双醋瑞因)具有较好的抗炎作用，其病理改变的Wakitani法形态学评分指数为6.17±0.75，IL-1β阳性细胞检出率为(28.94±3.9)﹪，与模型组动物比较，其差别具有高度显著性，p<0.01；③受试药物能显著地抑制软骨细胞中IL-1β的合成，其强度成剂量依赖关系，其中高、中剂量受试药物的作用强度优于阳性对照药物；④受试药物(D1，D2，D3)组间的IL-1β阳性细胞检出率和关节病理改变Wakitani法形态学评分指数分别为(21.783±3.819)﹪，(26.087±13.341)﹪，(30.383±4.880)﹪，3.29±0.49，4.50±0.55，7.83±0.98，其差别有显著性，p<0.05，显示抑制白细胞合成和抗炎作用成剂量依赖性；⑤受试药物抑制IL-1β合成与其抗炎作用的Wakitani法形态学评分指数的相关性，经F检验呈直线相关。结论：①Hulth法是制作兔实验性OA的有效方法，IL-1β在模型动物的关节软骨中有较高的表达，适宜用于药物作用靶点的研究；②白藜芦醇能显著的抑制软骨细胞中IL-1β的合成，其强度成剂量依赖关系，其中高、中剂量白藜芦醇的作用强度优于阳性对照药物双醋瑞因；(3)白藜芦醇抑制IL-1β合成与其抗炎作用的Wakitani法形态学评分指数的相关性，经F检验成直线相关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文词汇对照

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

第一章前言

第二章材料和方法

2.1材料

2.1.1动物

2.1.2待测药物：

2.1.3试剂及试剂盒

2.1.4主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1模型制作与动物分组

2.2.2给药

2.2.3病理改变光镜检查

2.2.4 DAB法检测软骨细胞IL-1β的方法

2.3统计学分析

第三章结果

3.1白藜芦醇对模型动物关节软骨切片HE染色光镜检查的病理形态学改变结果

3.2白藜芦醇对模型动物关节软骨切片病理改变的Wakitani法组织形态学评分结果

3.3白藜芦醇对关节软骨细胞分泌IL-1β的影响

3.3.1各组样本经DAB免疫组化法检出关节软骨切片中分泌IL-1β阳性细胞的形态学结果

3.3.2经DAB免疫组化法检测各组关节软骨细胞中IL-1β阳性细胞检出率的结果

3.4白藜芦醇对模型动物关节软骨的IL-1β的阳性细胞检出率与其相应的病理改变wakitani法形态学评分指数的相关分析，经F检验，呈直线相关

第三章讨论

4.1兔实验性骨关节炎动物模型的制备

4.2白藜芦醇对模型动物关节软骨病理形态学改变的影响

4.3白藜芦醇对关节软骨细胞分泌IL-1β的影响

4.4白藜芦醇抑制模型动物关节软骨细胞分泌IL-1β并且与其抗炎保护作用呈直线相关

第五章结论

第六章参考文献

第七章综述 白介素-1在骨关节炎发病机制中的作用

致谢

攻读学位期间主要的研究成果