米诺环素对慢性神经病理性疼痛大鼠脊髓星形胶质细胞激活的影响

摘要

目的：采用大鼠慢性坐骨神经结扎损伤(chronic constriction injuryCCI)建立慢性神经病理性疼痛模型。 1．观察CCI大鼠脊髓星形胶质细胞标志物胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，研究脊髓星形胶质细胞是否参与脊髓水平神经病理性疼痛伤害性信息的整合及其时程变化特征。 2．观察米诺环素对CCI大鼠脊髓星形胶质细胞标志物胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)表达的影响，探讨米诺环素对慢性神经病理性疼痛的作用效应及可能的机制。 方法：根据Bennett-Xie(1988)所述建立CCI模型。健康SD雄性大鼠75只随机分为5组：空白对照组(A组，n=10)；假手术组(B组，n=15)，B组大鼠仅分离暴露坐骨神经，不行坐骨神经结扎，余操作同C组；CCI对照组(C组，n=15)，C组大鼠在坐骨神经结扎损伤手术前1个小时，腹腔没有注射米诺环素，而给予与D组注射米诺环素(40mg/kg)相同体积的生理盐水，每24h注射一次，连续注射14天；CCI预给药组(D组，n=15)D组大鼠在坐骨神经结扎损伤手术前1个小时，腹腔注射米诺环素40mg/kg，每24h注射一次，连续注射到CCI术后14天；CCI治疗组(E组，n=20)，E组大鼠行坐骨神经结扎损伤手术，在确定慢性神经病理性疼痛模型建立成功之前仅注射与D组注射米诺环素(40mg/kg)相同体积的生理盐水，每24h注射一次，而在确定大鼠慢性神经病理性疼痛模型CCI建立成功后，腹腔开始注射米诺环素(40mg/kg)，每24h注射一次，连续注射到14天为止。分别测定各组在手术前(以第Od表示)以及手术后第1d、4d、7d、11d、14d损伤侧后肢机械刺激缩足阈值，然后相应分别取每组大鼠L<,4-6>段脊髓。采用免疫组化染色方法测定脊髓背角星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达。 结果： 1．五组大鼠手术前基础50﹪机械刺激缩足阈值无统计学差异(P>0.5)。A组、B组这二组大鼠各观测时点损伤侧50﹪机械刺激缩足阈值组内及组间比较也无统计学差异(P>0.5)。C组、D组、E组大鼠CCI术后第1d、4d、7d、11d、14d损伤侧50﹪机械刺激缩足阈值分别与术前比较均有不同程度降低(P<0.05或P<0.01)；尤以C组、E组大鼠在CCI术后14d损伤侧50﹪机械刺激缩足阈值显著降低(P<0.01)。其中D组大鼠与C组、E组术后各观测时点分别比较，50﹪机械刺激缩足阈值明显升高(P<0.01)。E组大鼠在确定慢性神经病理性疼痛模型CCI建立成功注射米诺环素后， CCI术后第7d、11d、14d与C组各相应时点比较损伤侧50﹪机械刺激缩足阈值有明显增高(P<0.05)。 2．免疫组化染色结果显示五组大鼠手术前脊髓星形胶质细胞GFAP免疫反应阳性细胞的平均光密度基础值无统计学差异(P>0.5)；A组、B组这二组大鼠各观测时点GFAP免疫反应阳性细胞的平均光密度值组内及组间比较无统计学差异(P>0.5)。C组、D组、E组大鼠CCI术后第4d、7d、11d、14d损伤侧GFAP免疫反应阳性细胞的平均光密度值与术前比较均有不同程度升高(P<0.05或P<0.01)，尤以C组、E组大鼠在CCI术后14d损伤侧GFAP免疫反应阳性细胞的平均光密度值显著增高(P<0.01)；其中D组与C组、E组CCI术后第4d、7d、11d、14d分别比较， GF-AP免疫反应阳性细胞的平均光密度值均明显降低(P<0.01)；E组大鼠在确定慢性病理性疼痛模型CCI建立成功注射米诺环素后， CCI术后第7d、11d、14d与C组各相应时点比较GFAP免疫反应阳性细胞的平均光密度值有明显降低(P<0.05)。 结论: 1．CCI大鼠可以出现不同时程的痛觉过敏，CCI术后中期脊髓的星形胶质细胞被激活，其激活增高程度与慢性神经病理性疼痛维持过程中机械刺激缩足阈值降低程度平行。 2．米诺环素的术前给药能明显降低脊髓星形胶质细胞的激活，从而更为有效减轻CCI大鼠的痛觉过敏。

目录

文摘

英文文摘

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第一部分前言

第二部分资料和方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3大鼠脊髓标本的采取和切片的制作

2.4 GFAP免疫组化染色步骤

2.5脊髓组织GFAP免疫反应阳性细胞观察测定

2.6数据统计处理：

第三部分结果

3.1 CCI大鼠疼痛行为学测试

3.2脊髓星形胶质细胞GFAP表达的测定

附图

第四部分讨论

第五部分结论

参考文献

综述 星形胶质细胞与疼痛

致谢