在CML细胞株中寻找与GST pi相互作用的蛋白质及GSTP1基因的甲基化分析

摘要

IFN-α是重要的抗病毒、抗肿瘤和具有免疫调节活性的细胞因子，是造血系统恶性肿瘤和淋巴瘤的最有效治疗剂之一。虽然在基因和转录水平对IFN-α的抗肿瘤效应及恶性肿瘤患者耐受IFN-α治疗的机理进行了深入的研究，但其详细的分子机制仍不十分清楚。 KT-1/A3与KT-1/A3R是慢性粒细胞白血病细胞，它们对IFN-α的敏感性不同，我们在这两株细胞中筛选出表达有差异的GST pi蛋白(编码基因为GSTPl)，并用RT-PCR和Westem blotting分别在基因和蛋白质水平对此进行了验证。 GSTpi是谷胱甘肽转硫酶(GSTs)大家族中的一个重要成员，近些年成为研究各种疾病病原学的焦点，尤其在肿瘤中。肿瘤组织中GSTPl基因的表达水平与正常组织相比，既有升高，也有下降，还有无变化，所以在不同肿瘤的发生发展中GSTPl基因的作用机制是不同的。为了了解GSTPl基因在CML的发生、发展及耐药中的作用机制，我们用His pull-down方法在KT-1/A3R细胞中寻找与GSTpi蛋白相互作用的蛋白质，并用MSP方法分析了KT-1/A3细胞株与KT-1/A3R细胞株GSTPl基因启动子区域CpG岛的甲基化状态。 然而由于种种原因，我们并没有从KT-1/A3R细胞中筛选出与GSTpi蛋白相互作用的蛋白质。甲基化分析结果显示，在KT-1/A3细胞中GSTPl基因启动子区域CpG岛甲基化与非甲基化共存，而KT-1/A3R细胞中只存在非甲基化状态。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

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一.前言

1慢性髓细胞性白血病及其治疗

2干扰素-α与慢性髓细胞性白血病

3 KT-1细胞系

4 KT-1/A3与KT-1/A3R细胞株IFN-α干扰组及对照组的蛋白质组学研究及本文的选题思路

二.材料与方法

1实验材料与试剂

2实验方法

2.1用RT-PCR验证GSTP1基因在KT-1/A3和KT-1/A3R细胞中的表达差异及两株细胞在IFN-α处理前后GSTP1基因表达的差异

2.2用Western blotting验证GST pi蛋白在KT-1/A3与KT-1/A3R细胞中表达的差异

2.3 GSTP1基因的原核表达及蛋白质纯化

2.4在KT-1/A3R细胞中用His pull-down寻找GST pi的相互作用蛋白质

2.5 GSTP1基因启动子CpG岛的甲基化分析

三.结果

1用RT-PCR验证GSTP1基因在KT-1/A3和KT-1/A3R细胞中的表达差异及两株细胞在IFN-α处理前后GSTP1基因表达的差异。

2用Western blotting验证GST pi蛋白在KT-1/A3与KT-1/A3R细胞中表达的差异

3 GSTP1基因的原核表达及纯化

4在KT-1/A3R细胞中用His Pull-down寻找与GST pi的相互作用蛋白质

5 GSTP1基因启动子CpG岛的甲基化分析

四.讨论

结论

参考文献

综述 GSTP1基因与肿瘤的关系

致谢

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