白藜芦醇对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究

摘要

目的:观察白藜芦醇对SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用并探索其作用机制。 方法:100μmol/L过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤，建立帕金森病(PD)细胞模型；用不同浓度梯度(0.5μmol/L，5μmol/L，50μmol/L，100μmol/L，125μmol/L，200μmol/L)的白藜芦醇处理SH-SY5Y细胞2小时后，用100μmol/L过氧化氢处理细胞8小时诱导氧化损伤。测量各组细胞的细胞存活率、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，检测不同基因(Bcl-2、Bax、CAT、nNOS、COX-2)mRN_A的表达水平和COX-2蛋白表达水平。从细胞、基因和蛋白质水平上，了解白藜芦醇对SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用及其可能的分子机制。 结果:100μmol/L过氧化氢处理SH-SY5Y细胞8小时后细胞的存活率为18.35％，大部分细胞的正常形态消失，提示成功诱导氧化损伤建立PD细胞模型。白藜芦醇预处理2小时能够提高氧化损伤后SH-SY5Y细胞存活率。在白藜芦醇0.5μmol/L至100μmol/L浓度范围内，细胞存活率随着白藜芦醇浓度的增加而增加，100μmol/L白藜芦醇组细胞存活率最高，达74.36％：在100μmol/L至200μmol/L浓度范围内，细胞存活率随着白藜芦醇浓度的增加而减少。在白藜芦醇0.5μmol/L～100μmol/L浓度范围内，Bcl-2基因的表达水平随着白藜芦醇处理浓度提高而逐渐升高；Bax、CAT、nNOS、COX-2等基因的表达水平和COX-2的蛋白表达水平随着Res处理浓度的增加逐渐降低。 结论:H<,2>O<,2>可诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤建立PD细胞模型。白藜芦醇对这种氧化损伤有明显保护作用，这种保护作用可能是通过影响氧化损伤及凋亡相关基因的表达水平实现。白藜芦醇在帕金森病等老年神经变性类疾病的防治中可能有很好的应用前景。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1实验仪器

2.1.2实验试剂

2.2方法

2.2.1 SH-SY5Y细胞培养与接种

2.2.2建立PD细胞模型

2.2.3测定细胞活力

2.2.4硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA含量

2.2.5 2-硝基苯甲酸(DTNB)法测定GSH-Px活力

2.2.6逆转录-聚合酶链式反应(RT-OCR)测定各组不同基因表达水平

2.2.7蛋白质免疫印迹技术(Western blotting)检测COX-2蛋白的表达

2.2.8统计学分析

第三章实验结果

3.1 PD细胞模型的建立

3.1.1 H2O2处理时间的确定

3.1.2 Res处理浓度的选择

3.1.3 PD细胞模型的建立

3.2 Res对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

3.2.1 Res对细胞存活率的影响

3.2.2 Res对MDA含量的影响

3.2.3 Res对GSH-Px活性的影响

3.2.4 Res对氧化损伤相关基因表达水平的影响

3.2.5 Res对COX-2蛋白水平的影响

第四章分析与讨论

4.1 PD细胞模型的建立

4.2Res对SH-SY5Y细胞氧化损伤的双向作用

4.3 Res对细胞氧化损伤后MDA含量和GSH-Px活性的影响

4.4Res抗氧化作用的分子机制

4.5 Res防治PD的展望

第五章结论

参考文献

附录

综述 白藜芦醇与帕金森病

致谢

攻读学位期间主要研究成果