一种递送基因的非病毒载体纳米颗粒的研制

摘要

目的：制备一种可用于基因递送的非病毒载体--壳聚糖载基因纳米颗粒，并对其理化性质和体外转染活性进行了研究，评价其应用于基因递送的非病毒载体系统的可行性。 方法：通过聚合物分散法制备出壳聚糖空载纳米粒后，用绿色荧光蛋白(PEGFP-C1)质粒做报告基因，以静电吸附的方式将PEGFP-C1质粒DNA和壳聚糖结合形成壳聚糖载基因纳米粒，再用不同浓度的MSS-PEG对纳米颗粒进行修饰，用扫描电镜和原子力显微镜观察其修饰前后的形态变化，激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位)，MTT试验检测壳聚糖纳米载体HepG2和COS7的细胞毒作用，DNase Ⅰ保护实验研究DNA一壳聚糖纳米颗粒对所携带基因的保护作用，用体外基因转染实验定性评价纳米粒的转染活性，用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察递送不同剂量的基因，寻找本递送系统较好的转染条件。 结论：壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内，并使报告基因在细胞内表达。因此，壳聚糖载基因纳米颗粒可以用作基因递送的非病毒载体系统，值得进一步研究。

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英文文摘

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研究背景

第一章DNA—壳聚糖纳米粒的制备

1.1材料与方法

1.1.1试剂与仪器

1.1.2方法

1.1.3统计学处理

1.2结果

1.2.1 DNA—壳聚糖纳米粒的形态特征

1.2.2 DNA—壳聚糖纳米粒的形态特征和粒径分布

1.3讨论

1.4结论

第二章壳聚糖载基因纳米颗粒相关特性的研究

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.1.3统计学处理

2.2结果

2.2.1壳聚糖纳米粒的细胞毒性

2.2.2提取质粒DNA的浓度以及DNA—壳聚糖纳米粒的DNA携带率

2.2.3 DNA—壳聚糖纳米粒对DNA的保护作用

2.2.4用倒置荧光显微镜观察DNA—壳聚糖纳米粒在体外对COS 7细胞的转染结果

2.2.5用流式细胞仪对报告基因细胞进行转染效率测定

2.3讨论

2.4结论

参考文献

综述 纳米药物载体系统研究进展

致谢