HIC-1基因在宫颈癌Hela细胞中的表达及其甲基化调控

摘要

目的：检测甲基化抑制剂处理前后宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡改变，及HIC-1、HPV表达的变化，初步探讨去甲基化对宫颈癌中HIC-1基因及HPV表达的影响。 方法：分别用不同浓度5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预细胞5d。提取细胞的RNA，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HIC-1mRNA、P53mRNA、HPV18E6mRNA在干预后表达变化情况；用直接记数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)显色法检测细胞生长曲线与细胞增殖实验。 结果： (1)凝胶图像分析仪分析RT-PCR产物：实验组5-Aza-CdR(终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用Hela细胞5d前后，①各实验组和对照组HIC-1 mRNA/β-actin分别为0.486±0.025、O.548±0.014、0.864±0.032、0.927±0.031，随着5-Aza-CdR浓度的升高，其表达随之增加，经方差分析对照组和实验组之间差异具有显著性(F=701.430，P<0.05)。②实验组和对照组P53 mRNA/β-actin分别为0.063±0.026、0.207±0.028、0.598±0.030、0.807±0.029。经方差分析多重比较结果显示试验组与对照组有显著性差异(F=446.673，P<0.05)。③实验组和对照组HPV18E6mRNA/β-actin分别为0.405±0.022、0.373±0.021、0.377±0.015、0.408±0.012，各实验组和对照组数据之间差异无显著性(F=2.900，P>0.05)，即5-Aza-CdR干预前后，HPV18E6mRNA表达无明显改变。 (2)经终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的5-Aza-CdR处理HeLa细胞5d后，MTT检测各实验组细胞活力分别为(A490值)65.08％±4.06％、49.68％±1.49％、38.80％±3.00％，与对照组(A490值)91.22％±2.7％，比较有明显差异(F=208.39 P<0.05)。在所检测的浓度范围内随着5-Aza-CdR浓度的增加，对HeLa细胞作用随之增加，呈量-效关系(相关度比较R=-0.969：P<0.05)。 (3)5-Aza-CdR处理前后Hela细胞形态学出现以下改变：倒置显微镜下观察，对照组细胞生长良好，细胞伸展、透亮，呈不规则对角型，随时间推移，细胞逐渐增多，细胞接触紧密。实验组20μmol/L的5-Aza-CdR作用5d后Hela细胞细胞密度降低，汇合度约为对照组的70％，细胞形态未见明显改变。 结论： 1.HIC-1基因甲基化是HIC-1基因表达下调的重要机制之一； 2.HIC-1基因甲基化可能在宫颈癌Hela细胞增殖中发挥作用； 3.5-Aza-CdR可抑制Hela细胞增殖，并在一定浓度范围内呈量效关系。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

附图

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述 宫颈癌中染色体杂合性丢失及抑癌基因的研究

致谢