精子因素对不明原因反复自然流产的影响

摘要

背景知识：反复性自然流产(recurrent pregnancy loss，RPL)影响着约0.5～1.0％夫妇，患者遭受了极大的痛苦。导致RPL的原因很多，且有半数以上患者原因不明。目前，对RPL病因学的研究主要集中于女性，男性因素相对较少。男性配子构成胚胎基因组成分的一半，精子遗传异常可影响胚胎继续发育而导致流产。研究报道显示精子染色体非整倍体与RPL相关，采用TUNEL、吖啶橙染色法(acridine orange test，AOT)等方法分析发现不明原因反复流产(unexplained RPL，URPL)夫妇丈夫精子DNA完整性与对照组相比有显著差异，DNA损伤明显增加。 目的：进一步研究精子因素在URPL中的作用，并分析DNA完整性较差的患者可能存在的基因突变。 方法：以21对URPL夫妇中丈夫为研究对象(病例组)，选择20名已生育过健康后代的男性作为对照组，收集他们的精液。应用三色荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)技术分析精子18号、X和Y染色体非整倍体率；应用精子染色质结构分析(sperm chromatin structure assay,SCSA)方法分析精子DNA完整性。并对DNA碎片指数(DNA fragmentation index，DFI)值≥27％(表示DNA完整性较差)的患者，收集其外周血并抽提gDNA，PCR扩增产物经变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC)分析并结合测序检测Tnp1和Tnp2基因突变。 结果： (1)、与对照组相比，URPL组精子常规参数没有差异，但正常形态率下降；DFI值增加，并有8例患者DFI≥27％，DNA完整性有显著差异，高DNA可染性(high DNA stainability，HDS)值没有差异；精子18号、性染色体非整倍体率有显著差异。 (2)、突变分析结果：8例DNA完整性较差的患者，所有检测区域均呈单一正常峰型，没发现相关的突变。 结论： (1)、精子形态、DNA完整性和精子染色体非整倍体是URPL，的相关性因素，建议临床对这部分夫妇病因分析时进行这三项检查。 (2)、结果提示DNA损伤可能是多因素性、多环节的作用过程。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文对照简表

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实验技术路线

前言

第一章 URPL夫妇丈夫精子形态、染色体非整倍体和DNA完整性分析

1.对象、材料与方法

2.结果

3.讨论

4.小结

第二章DNA完整性较差患者Tnp1、Tnp2基因突变分析

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

4.小结

结 论

参考文献

综述 男性因素对反复自然流产的影响

致 谢

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