高效液相色谱荧光法测定血清犬尿氨酸和犬尿喹啉酸及其临床应用

摘要

目的：1.建立一种简单、快速并能同时测定血清中的犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)。 2.探讨血液标本的采集与保存对犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)测定结果的影响。 3.用该方法建立正常人血清犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)含量以及KYNA/KYN比值参考值范围。 4.初步探讨慢性肾功能衰竭(CRF)中血清犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)含量以及KYNA/KYN比值的临床意义。 方法：1.血清标本与等量5％(V/V)高氯酸溶液混合处理去除蛋白后离心取上清液20μl直接进样分析。用Hypersil C8柱(300mm×6.0mm i.d.，10μm)分离；流动相为0.25mol/L醋酸锌及50mmol/L醋酸溶液(含3％乙腈v/v)；流速1.5ml/min；荧光检测波长：0-10min激发波长和发射波长分别为365nm和480nm，10min后激发波长和发射波长分别变换为344nm和404nm。室温下约15分钟完成分析测定。KYN和KYNA均采用峰保留值比较法和叠加法进行定性分析，用外标法测定峰面积进行定量分析。考察了5-羟色胺(5-HT)、色氨酸(TRP)、苯丙氨酸(PHE)、酪氨酸(TYR)和肌酐(Cr)等对待测组分(KYN和KYNA)的可能干扰。 2.利用高效液相色谱-荧光法检测法测定EDTA-K2抗凝血浆及血清在室温(25±1)℃、4℃、冰冻(-20℃)保存下0、24、72、120、168h后KYN和KYNA的浓度。 3.测定健康体检者(n=71例)血清KYN和KYNA含量，并计算KYNA/KYN比值，以95％可信限界定相应参数的范围。 4.测定慢性肾衰竭(CRF)患者(n=76例)血清KYN、KYNA含量，探讨慢性肾衰患者不同阶段血清KYN和KYNA含量变化及其在鉴别诊断、治疗监测、机制研究等方面的临床意义。 结论： 1.本文建立的HPLC-FLD法可同时测定血清KYN和KYNA，方法简单、快速、灵敏、特异、准确，适宜于临床与科研工作。 2.EDTA-K2抗凝血浆和血清KYN和KYNA测定结果差异均无统计学意义。血清标本在室温(25℃±1)条件下可稳定三天，若不能及时检测时，最好置于≤-20℃条件下保存。 3.在国内首次使用HPLC-FLD同时测定正常人血清中KYN和KYNA含量和KYNA/KYN比值，可为相关研究工作提供参考数据。 4.通过对CRF患者血清KYN和KYNA含量的测定，结果表明CRF患者血清KYN和KYNA含量随病情发展发生变化，并与血清Ur和Cr等肾功能指标相关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

第一部分高效液相色谱法同时检测血清犬尿氨酸和犬尿喹啉酸方法的建立及评价

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第二部分血标本的采集与保存的某些因素对犬尿氨酸和犬尿喹啉酸测定的影响

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第三部分慢性肾衰竭(CRF)患者血清KYN和KYNA含量及KYNA/KYN比值的变化

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

结论

参考文献

综述：慢性肾功能衰竭发展的机制研究现状

致谢

攻读学位期间主要研究成果