神经酰胺在软脂酸培养的人脐静脉内皮细胞PKB/eNOS信号通路变化中的作用机制研究

摘要

目的:观察高浓度的游离脂肪酸：软脂酸(palmihate)、棕榈油酸(palmitoleate)、油酸(oleate)、亚油酸(linoleate)培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内神经酰胺(ceramide)浓度变化，探讨在游离脂肪酸培养的血管内皮细胞是否存在神经酰胺积聚及可能的机制。 方法: ①4种游离脂肪酸对细胞膜及细胞内神经酰胺的影响：HUVECs分别用600μM软脂酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸培养16小时，以高压液相色谱联合质谱的方法(LC/MS/MS)检测细胞膜及细胞内神经酰胺浓度的变化。 ②软脂酸对细胞膜及细胞内神经酰胺的影响：HUVECs分别用200μM、400μM、600μM软脂酸培养16小时，600μM软脂酸培养4、8、16、24、32小时，以高压液相色谱联合质谱的方法检测细胞膜及细胞内神经酰胺浓度的变化。 ③神经酰胺基础合成途径特异性阻断剂myriocin和FB1对软脂酸培养人脐静脉内皮细胞神经酰胺的影响： HUVECs用600μM软脂酸+10μM myriocin培养16小时；或600μM软脂酸+10μM FB1培养细胞16小时以高压液相色谱联合质谱的方法检测细胞膜及细胞内神经酰胺浓度的变化。 结果: ①软脂酸呈时间和剂量依赖性的升高人脐静脉内皮细胞细胞膜及细胞内神经酰胺的浓度，以16h变化最明显。高浓度棕榈油酸、油酸、亚油酸对人脐静脉内皮细胞细胞膜及细胞内神经酰胺的浓度无显著影响。 ②高浓度软脂酸显著升高人脐静脉内皮细胞细胞膜及细胞内神经酰胺的浓度，神经酰胺基础合成途径抑制剂Myriocin可以完全阻断软脂酸所致的细胞神经酰胺浓度增加。FB1也可以完全阻断软脂酸所致的细胞神经酰胺浓度增加。 结论:软脂酸显著升高人脐静脉内皮细胞神经酰胺的浓度，神经酰胺浓度升高与激活神经酰胺从头合成途有关，棕榈油酸、油酸、亚油酸对血管内皮细胞神经酰胺浓度均无影响。

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引言

第一章游离脂肪酸培养的人脐静脉内皮细胞神经酰胺浓度的变化及机制研究

1.1前言

1.2材料与方法

1.3结果

1.4讨论

1.5小结

第二章神经酰胺在软脂酸培养的人脐静脉内皮细胞信号通路变化中的作用机制研究

2.1前言

2.2材料与方法

2.3结果

2.4讨论

第三章罗格列酮对高浓度软脂酸培养的人脐静脉内皮细胞PKB/eNOS影响及作用机制研究

3.1前言

3.2材料与方法

3.3结果

结论

参考文献

综述 神经酰胺与代谢综合征

致谢

攻读博士期间主要研究成果