纳米银-表皮生长因子缓释复合体的制备条件探讨与结合率研究

摘要

目的：研究纳米银（Nano-silver）与表皮生长因子（EGF）结合成复合体的最佳反应条件及表皮生长因子在不同浓度下与纳米银的结合率，为纳米银--表皮生长因子复合体的制备提供依据。 方法与材料：先配制终浓度为200μg/ml的表皮生长因子和浓度为5000ppm的纳米银溶液。在不同反应条件下混合表皮生长因子和纳米银溶液，并以超声分散方法制备对应的纳米银表皮生长因子复合体（复合体中EGF终浓度为50μg/ml，纳米银终浓度为500ppm），再分组进行检测。实验分为单纯表皮生长因子组、单纯纳米银组、纳米银表皮生长因子复合体组（简称复合体组）、蒸馏水对照组。复合体组依据不同反应条件分为不同亚组：①依pH值不同分为5.0、6.0、7.0和8.0四个亚组；②依反应温度不同分为4℃、25℃和37℃三组；③依反应时间不同分为12小时、24小时和36小时三组。在上述各种反应条件下对反应产物进行低温高速离心（4℃，13000rpm）30分钟，取上清液（反复离心至上清液澄清），将上清液进行Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Tricine-SDS-PAGE电泳），再利用Image Quant350凝胶成像系统软件对电泳结果进行定量分析，从而得到各组上清液中EGF相对含量百分率，进一步计算出不同反应条件下表皮生长因子与纳米银的结合率，并寻找两者的最佳结合条件。然后在最佳反应条件下，取浓度分别为50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml的表皮生长因子与500ppm的纳米银进行复合，再次利用Tricine-SDS-PAGE电泳及Image Quant350凝胶成像系统软件分析观察不同浓度的表皮生长因子与固定浓度纳米银溶液的结合率，得出表皮生长因子随浓度变化与纳米银结合率的变化。 结果：Tricine-SDS-聚丙烯酰胺电泳实验中单纯表皮生长因子组和纳米银--表皮生长因子复合体组有明显条带，单纯纳米银组和蒸馏水对照组未见电泳条带。pH值为5.0、6.0、7.0、8.0的反应条件下制备的纳米银--表皮生长因子复合体的相对结合率分别为：17.39％±0.11％、16.09％±0.17％、28.32％±0.10％、19.36％±0.23％，经统计学分析，不同pH值下表皮生长因子与纳米银反应的结合率有明显差异；各pH值下复合体结合率两两比较P值均小于0.05，有统计学意义，pH值为7.0时的结合能力最强。温度为4℃、25℃、37℃的反应条件下制备的复合体的相对结合率分别为：23.20％±1.17％、15.51％±0.74％、29.89％±0.80％，具有明显差异；各反应温度下复合体结合率两两比较P值均小于0.05，有统计学意义，温度为37℃时的结合率最高。反应时间为12小时、24小时、36小时制备的复合体的相对结合率分别为：28.55％±0.15％、33.41％±0.24％、17.29％±0.19％，具有明显差异；各反应时间下复合体结合率两两比较P值均小于0.05，有统计学意义，反应时间为24h时的结合率最高。在纳米银浓度为500ppm溶液中，表皮生长因子的浓度为50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml时的相对结合率分别为：26.27％±0.58％、21.29％±0.47％、19.03％±0.59％、16.48％±0.24％，可见在浓度固定的纳米银溶液下，不同浓度表皮生长因子与纳米银复合体的结合率具有明显差异，不同浓度EGF条件下复合体结合率两两比较P值均小于0.05，有统计学意义，表皮生长因子与纳米银的结合率随着表皮生长因子的浓度升高逐渐下降，绝对结合量随表皮生长因子浓度升高而升高。 结论：不同反应条件下制备的纳米银--表皮生长因子复合体的结合率不同，本实验中结合率最高的反应条件为pH值为7.0，温度为37℃，反应时间为24小时；在固定浓度的纳米银溶液中，不同浓度的表皮生长因子与纳米银的结合率不同，结合率随表皮生长因子的浓度升高而逐渐下降。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前言

第二章 材料与设备

第三章方法与步骤

第四章 结果及分析

第五章讨论

第六章 结论

参考文献

综述1 纳米粒子与多肽类物质

综述2 负压引流与创面修复

致谢

攻读学位期间科研成果