P5D2对宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的作用

摘要

目的：建立宫颈鳞癌细胞HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞HUVEC模型，初步探讨多细胞球体中整合素β1的表达与浸润内皮细胞的关系，以及抗整合素β1单克隆抗体P5D2对HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的作用。 方法： （一）：建立宫颈鳞癌细胞HCE1多细胞球体浸润单层人脐静脉内皮细胞系HUVEC模型（以下均简称宫颈鳞癌HCE1浸润模型）：将HCE1多细胞球体与HUVEC细胞共同培养，在模型建立的第0，1，4，7天分别用倒置显微镜拍摄HCE1多细胞球体浸润单层HUVEC细胞的程度。用Motic med数码医学图像分析系统软件计算处理HCE1多细胞球体浸润的范围。 （二）：免疫细胞化学SABC法检测HCE1单层细胞、HCE1多细胞球体以及HUVEC细胞中整合素β1的表达。 （三）：P5D2对HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的作用 1.分组：干预组P5D2终浓度为1ug/ml，对照组为等浓度的mIgG。 2.观察：在模型建立的第0，1，4，7天分别用倒置显微镜拍摄两组模型中HCE1多细胞球体浸润单层HUVEC细胞的程度。用Motic med数码医学图像分析系统软件计算处理两组模型中HCE1多细胞球体浸润的范围。 3.免疫细胞化学SABC法检测P5D2干预宫颈鳞癌HCE1浸润模型后和对照组第4天整合素β1表达。 结果： （一）宫颈鳞癌HCE1浸润模型的建立。 1.HCE1单层细胞培养：显微镜下见细胞生长状态良好，细胞胞浆透亮，细胞贴壁后呈不规则对角形。 2.HCE1多细胞球体培养：HCE1细胞旋转培养24小时可见细胞聚集成团，并随培养时间的延长，结构更加紧密，直径逐渐增大，培养至第4天开始出现坏死核心。 3.HUVEC细胞培养：胞体呈多角形，相互嵌合，为单层呈铺路石状排列。 4.宫颈鳞癌HCE1浸润模型：倒置显微镜下观察7天，在镜下能很明显的区分HCE1多细胞球体和HUVEC单层细胞，将宫颈鳞癌HCE1多细胞球体与人脐静脉内皮细胞HUVEC共同培养1小时，镜下见HCE1多细胞球体紧密粘附于HUVEC单层细胞上，摇之不动，但不在一个焦距平面。宫颈鳞癌HCE1浸润模型建立第1天，镜下见HCE1多细胞球体出现解聚，向周围HUVEC细胞扩散。第4天，镜下见HCE1多细胞球体侵入HUVEC细胞，替代HUVEC细胞退缩的部位，形成侵袭聚集点，中间可见坏死核心，周围可见单层HCE1细胞生长晕，HCE1多细胞球体与HUVEC细胞呈同一聚焦平面。第7天，镜下见HCE1多细胞球体占据面积更大，边界与HUVEC细胞融合欠清。 （二）：免疫细胞化学SABC法检测整合素β1的表达： HCE1多细胞球体中整合素β1阳性高表达率高于HCE1单层细胞，经统计学分析两组比较差异有显著性（Pearson X2=19.20，P<0.005），HUVEC细胞中整合素β1阴性表达。 （三）：P5D2对HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的作用 1.P5D2干预后宫颈鳞癌HCE1浸润模型：倒置显微镜下观察7天，药物干预后的模型浸润程度明显小于对照组，P5D2干预后第1天，镜下见HCE1多细胞球体解聚，浸润面积稍小于mIgG组，降低了32.16％，经统计学分析两组差异有显著性（p<0.001）。第4天镜下与mIgG组相比，浸润面积明显降低，达60.77％，经统计学分析两组差异有显著性（p<0.001）。第7天镜下与mIgG组相比，浸润面积经P5D2阻断更显著，较对照组降低了84.68％，经统计学分析两组差异有显著性（p<0.001）。 2.免疫细胞化学SABC法检测P5D2干预宫颈鳞癌HCE1浸润模型后第4天整合素β1表达：对照组整合素β1的阳性高表达率高于P5D2干预后宫颈鳞癌HCE1浸润模型，经统计学分析两者比较差异有显著性（Pearson X2=21.69，P<0.005）。 结论： 1成功建立HCE1多细胞球体浸润单层人脐静脉内皮细胞HUVECC模型。2整合素β1在多细胞球体、浸润模型中的表达上调可能与细胞粘附力、侵袭力增强有关。3抗整合素β1单克隆抗体P5D2能够部分阻断HCE1多细胞球体对单层人脐静脉皮HUVEC细胞的浸润。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述 整合素在妇科肿瘤浸润、转移中的作用及其拮抗剂在临床中应用的研究进展

致谢