结直肠癌组织LOH12CR1编码区突变筛查和兔抗人LOH12CR1抗体的制备

摘要

Peutz-Jeghers综合征（PJS）是一种以皮肤粘膜色素沉着、多发性胃肠息肉以及肿瘤易患性增加为特征的常染色体显性遗传疾病，肿瘤抑制基因LKB1（又名STK11）是其致病基因。LKB1的编码产物是长为433的丝/苏氨酸蛋白激酶LKB1。曾采用GST-Pull down技术和免疫共沉淀实验在L02细胞中筛选并验证了LKB1新的功能未知的相互作用蛋白LOH12CR1。LOH12CR1位于12号染色体上，在脑，骨髓，睾丸，前列腺，胎肝等多种组织中均有表达，并且进化上高度保守。其所在区域D12S89-D12S358在各造血系统恶性肿瘤及乳腺、肺、卵巢等实体肿瘤中常有杂合子缺失现象，在发生12p杂合缺失的白血病患者中LOH12CR1表达丰度有降低。本研究将12对癌及癌旁组织通过逆转录PCR的方法，扩增LOH12CR1的编码区并对PCR产物直接测序进行突变筛查，所检测的标本均未发现异常。 介于LOH12CR1在进化上的高度保守性，以及其与具有重要生理和病理功能的LKB1具有相互作用的事实，推测其可能具有较为重要的生物学功能。为了研究组织、细胞中LOH12CR1的内源性表达水平的差异，希望获LOH12CR1蛋白的特异性抗体。为此，本研究利用纯化的LOH12CR1融合蛋白与弗氏佐剂混合免疫兔，获得特异性的兔抗人LOH12CR1血清，并通过Western-bolt实验对其进行验证，证实获得的抗体可用于Western-bolt实验。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章 结直肠癌组织LOH12CR1编码区的突变筛查

1 材料与试剂

2 方法

3 实验结果

4 分析与讨论

5 结论

第二章 兔抗人LOHl2CR1抗体的制备

1 材料与试剂

2 方法

3 结果

4 分析与讨论

5 结论

参考文献

综述 LKB1的C末端功能研究

致谢

攻读学位期间主要的研究成果