兔抗人MiR-338抗体制备与鉴定

摘要

目的制备兔抗人MiR-338分子多克隆抗体。方法PCR法扩增出MiR-338基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3)、IPTG诱导重组蛋白的表达,Ni^2+-NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA、Western blot和免疫组织化学法检测抗体。结果成功构建了MiR-338原核表达载体pET28/MiR-338,高效表达并纯化MiR-338蛋白,间接ELISA检测所制备抗体的效价为1:6400,Western blot显示该抗体能与MiR-338特异结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人卵巢癌组织中的天然的MiR-338。结论成功地制备了效价高、特异性较强兔抗人MiR-338抗体,为进一步建立MiR-338的ELISA检测方法和探讨MiR-338在卵巢癌的发生发展中所起的重要作用奠定了良好的基础。