内源性氢化可的松代谢与环孢霉素血药浓度剂量比的相关性研究

摘要

目的 研究尿中氢化可的松（F）及可的松（E）6β-羟基化代谢率与环孢霉素（CsA）血药浓度剂量比的相关性。方法 尿中F和E采用高效液相色谱紫外吸收法（HPLC-UV）测定。采用Diamonsil C18色谱柱（200×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液进行梯度洗脱，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为254nm。样品提取剂为二氯甲烷。尿中6β-羟基化氢化可的松（6β-OHF）和6β-羟基化可的松（6β-OHE）的浓度也采用HPLC-UV法测定。采用Diamonsil C18色谱柱（200×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液进行梯度洗脱，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为244 nm。样品处理包括以下步骤：尿样上Oasis HLB固相萃取柱后被乙酸乙酯-乙醚的混合溶剂洗脱，有机相再用硫酸钠饱和的碱液和酸液洗杂质。在肾移植患者尿中F及E的6β羟基化代谢率与CsA血药浓度剂量比的相关性研究中，共有105名肾移植病人（80名男性，25名女性）参加了该试验。在试验当天清晨受试者服用CsA前，收集血样和尿样各约5 mL。尿中6β-OHF、6β-OHE、F和E的浓度用HPLC-UV法测定。全血中CsA稳态谷浓度用荧光偏振免疫分析法（FPIA）测定。采用Spearman秩相关检验比较尿中6β-OHF+6β-OHE/F+E和CsA血药浓度剂量比（C/D）、6β-OHF+6β-OHE/F+E和体重校正的CsA血药浓度剂量比（C/D/W）之间的相关性，同时采用Wilcoxon秩和检验比较各项指标之间的差异。结果 F、E和内标峰在该色谱条件下得到较好分离。尿中F和E的定量下限均为5.0 ng·ml-1，3种不同浓度下测得的准确度在89.74％和107.64％之间，日内和日间精密度均小于12.21％。尿中F和E在5.0-320.0和5.0-400.0 ng·ml-1浓度范围内线性关系良好。尿中6β-OHF、6β-OHE和内标峰在该色谱条件下也得到较好分离。6β-OHF和6β-OHE的定量下限均为5.0 ng·ml-1，3种不同浓度下测得的准确度在92.16％和109.77％之间，日内和日间精密度均小于7.4％。6β-OHF和6β-OHE在5.0-500.0和5.0-400.0 ng·ml-1浓度范围内线性关系良好。在肾移植患者尿中F及E的6β羟基化代谢率与CsA血药浓度剂量比的相关性研究中，无论考虑全部受试者以及男性或女性受试者的数据，6β-OHF+6β-OHE/ F+E与C/D、C/D/W均存在一定相关性。各项指标在术后不同时间同样存在相关性。钙通道阻滞剂合用组较不合用组则表现出相对较弱的负相关。6β-OHF+6β-OHE/F+E在术后不同时间段没有明显差异，而C/D、C/D/W则存在显著性差异。6β-OHF+6β-OHE/F+E和C/D存在性别间差异，而C/D/W则没有表现出明显的性别间差异。合用钙通道阻滞剂使6β-OHF+6β-OHE/F+E显著降低，而C/D和C/D/W则没有明显变化。结论 本研究提供了两种简便、灵敏、准确的高效液相紫外检测法，适用于同时测定尿中F和E以及6β-OHF和6β-OHE的浓度。6β-OHF+6β-OHE/F+E和CsA血药浓度剂量比之间存在一定的负相关性，可能可以用于评价同为生物药剂学分类Ⅱ类的CYP3A和P-gp重叠底物药动学，但是更加准确的指标还有待于进一步的研究。

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论文说明:本文所用英文缩写词表

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前言

第一章 HPLC-UV法同时测定尿中氢化可的松和可的松

1.1试验材料

1.2试验方法

1.3试验结果

1.4讨论

1.5结论

第二章 HPLC-UV法同时测定尿中6β-羟基化氢化可的松和6β-羟基化可的松

2.1试验材料

2.2试验方法

2.3试验结果

2.4讨论

2.5结论

第三章 肾移植患者尿中氢化可的松及可的松6β-羟基化代谢率与CsA血药浓度剂量比的相关性研究

3.1试验材料

3.2试验方法

3.3试验结果

3.4讨论

3.5结论

参考文献

综述 内源性氢化可的松代谢在预测CYP3A底物药动学及活性评价中的研究进展

致谢

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