JAK2V617F基因突变与骨髓增殖性疾病关系的临床研究

摘要

目的:探讨分析JAK2V617F突变与骨髓增殖性疾病(MPD)的关系。
　　方法:1、对236例MPD或其他恶性血液病患者进行回顾性诊断,并按疾病进行分类。2、常规方法抽提所有患者的基因组DNA。3、用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测所有患者JAK2基因V617F突变,并对部分病人的PCR产物进行测序。4、分析各种疾病JAK2V617F突变的阳性率,比较JAK2V617F阳性与阴性患者的临床及实验室特征的关系。
　　结果:(1)236例患者包括BCR-ABL(-)的MPD患者157例,其中PV44例,ET 63例,PMF 48例,CNL 1例,CEL 1例;BCR-ABL(+)的CML26例;MDS 26例;CMML5例;AML 13例;ALL 2例;CLL 2例;淋巴瘤5例。(2)应用AS-PCR法共检出JAK2V617F阳性患者共110例。其中BCR-ABL(-)的MPD患者JAK2V617F(+)107例,总体阳性率68.1％,包括PV患者40例(阳性率91%),ET患者39例(阳性率62%),PMF 27例(阳性率56%)以及1例CNL患者。还分别在MDS、CMML及AML患者中各检出1例JAK2V617F(+)患者。26例BCR-ABL(+)的CML患者中无一例检测出JAK2V617F突变。9例淋系肿瘤(ALL、CLL及淋巴瘤)患者亦未检测出JAK2V617F突变。(3) BCR-ABL(-)的MPD患者JAK2V617F基因突变阳性率(68.1%)明显高于CML及其他疾病患者(P＜0.05)。在MPD患者中PV组、ET组、PMF组的JAK2V617F基因突变阳性率有统计学差异(P=0.01)。进一步进行组间两两比较,PV组的JAK2V617F突变阳性率高于ET组和PMF组(P=0.01;P＜0.05)。ET组和IMF组比较,JAK2V617F基因突变率无显著差异(P=0.548)。44例PV患者中40例JAK2V617F阳性者与4例JAK2V617F阴性患者相比较,阳性组的外周血白细胞计数、血小板计数与阴性组相比有显著性差异(P＜0.05)。两组性别、年龄、肝脾肿大、外周血白细胞计数、骨髓增生程度、骨髓纤维化、并发症方面均无统计学差异。63例ET患者中JAK2V617F阳性组(39例)与阴性组(24例)相比较,参数包括性别、年龄、肝脾肿大、外周血白细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数、骨髓增生程度、骨髓巨核细胞计数、并发症等。结果发现阳性组的外周血白细胞计数、血红蛋白水平以及血栓并发症较阴性组增高且有显著性差异(P=0.004,P＜0.05,P=0.015),其它各项均无统计学差异。27例JAK2V617F阳性的PMF患者与21例JAK2V617F阴性的PMF患者对比,阳性组白细胞计数与阴性组对比升高(P=0.04),两组性别、年龄、肝脾肿大、血红蛋白水平、血小板计数、骨髓增生程度、骨髓纤维化程度、并发症方面均无统计学差异。
　　结论:(1)本组病例在BCR-ABL阴性的MPD中JAK2V617F突变总体阳性率为68.1%,其中PV 91%,ET 62%,PMF56%;而在BCR-ABL阳性的CML中阳性率为0。(2)JAK2V617F突变在PV、ET和PMF患者中的发生率具有明显差异性,PV患者的突变阳性率显著高于ET和PMF患者。(3)在非典型MPD中,发现了1例CNL患者存在JAK2V617F突变,其意义有待进一步确定。(4)本实验在MDS、CMML及AML患者中各检出1例JAK2V617F阳性患者,而在ALL、CLL及淋巴瘤患者中未检测到该突变,说明JAK2V617F突变仅见于髓系血液肿瘤,在淋系血液肿瘤中不存在该突变。(5)在经典MPD患者中,即PV、ET、PMF患者中JAK2V617F突变阳性组的外周血白细胞计数均较阴性组高。PV患者突变阳性组的血小板计数也较阴性组升高。ET患者突变阳性组除白细胞增多外,血红蛋白水平和发生血栓的几率均较阴性组显著增高。

目录

中文摘要

ABSTRACT

英文缩略词表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1 研究材料

2.1.1 研究对象

2.1.2 诊断标准

2.2 研究试剂

2.2.1 试剂盒

2.2.2 主要试剂

2.2.3 主要溶液配制

2.2.4 PCR引物

2.3 仪器设备

2.4 研究方法

2.4.1 基因组DNA提取

2.4.2 Allele-specific PCR检测JAK2V617F突变

2.4.3 琼脂糖凝胶电泳

2.4.4 PCR产物纯化及测序

2.4.5 患者临床特征分析

2.5 统计学分析

第三章 结果

3.1 提取的DNA纯度及含量测定

3.2 凝胶电泳分析AS-PCR扩增产物

3.3 部分病例JAK2V617F测序结果

3.4 AS-PCR检测JAK2V617F阳性率

3.5 MPD患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析

3.5.1 PV患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析

3.5.2 ET患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析

3.5.3 PMF患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

第六章 综述

参考文献

致谢