锌转运体8自身抗体(ZnT8A)对中国1型糖尿病的诊断价值研究

摘要

本文对锌转运体8自身抗体（ZnT8A）对中国1型糖尿病的诊断价值进行了研究。本研究分为三个部分：
　　 第一部分：ZnT8A放射配体检测法的建立与评价。
　　 目的：建立锌转运体8自身抗体(ZnT8A)的放射配体检测法(RLA),初步探讨其对中国1型糖尿病(T1DM)的诊断价值。
　　 方法：采用重组人ZnT8质粒,经试管内转录与翻译,获得35S-ZnT8抗原,35S-ZnT8与血清在自制旋转孵育器上旋转温育后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物。免疫复合物经TBST缓冲液洗涤后,用多功能闪烁发光分析仪检测沉淀物放射性计数值。通过参加由国际糖尿病免疫学会(IDS)和美国疾病预防控制中心(CDC)联合举办的第六次糖尿病自身抗体国际标准化评估(DASP2009),评价方法的灵敏度和特异性。并检测539例1型、555例2型糖尿病患者以及405例正常人ZnT8A水平,初步评价其临床应用价值。
　　 结果：①该方法批内变异系数3.9％～9.8％,批间变异系数4.3％～13.8％；DASP2009结果反馈显示,该方法灵敏度66％(50例T1DM患者中检测出阳性33例),特异性100％(100例健康人全检测出阴性)；②受试者操作特性曲线(ROC)分析显示,曲线下面积为0.879±0.034,95％可信区间为0.813～0.945；③该方法阳性阈值ZnT8A指数为0.011(.405例正常人的99％百分位点)；④检测T1DM患者阳性率24.1％(130/539),显著高于2型糖尿病患者的1.1％(6/555)和健康人的0.99％(4/405)(χ2值分别为182.3和98.6,均有P＜0.0001)。
　　 结论：①建立的RLA法检测ZnT8A敏感性高、特异性强、重复性好；②ZnT8A在T1DM中阳性率较高,其对中国T1DM的诊断与分型具有实用价值。
　　 第二部分：ZnT8A在1型糖尿病中的分布规律研究。
　　 目的：探讨中国1型糖尿病(T1DM)患者中锌转运体8自身抗体(ZnT8A)的阳性率及其分布规律。
　　 方法：采用放射配体检测法(RLA)检测539例T1DM患者、555例2型糖尿病(T2DM)患者、405例正常对照血清ZnTSA。T1DM来自1999年10月至2009年12月中南大学湘雅二医院门诊及住院T1DM患者及湖南省T1DM协作组,平均诊断年龄24.0岁(1.0～70.0岁),平均病程2月(0～348月),其中男性293例,女性246例。同时采用放射配体法检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)。
　　 结果：①T1DM组ZnT8A阳性率24.1％(130/539)显著高于T2DM组1.1％(6/555)与正常对照组1.0％(4/405)(均P＜0.001),但在T2DM组与正常对照组之间差异无显著性(P＞0.05)；②GADA和/或IA-2A阳性T1DM中ZnT8A阳性率31.2％(101/324)显著高于GADA和IA-2A阴性的T1DM中ZnT8A阳性率13.5％(29/215)(P＜0.001)；③中国T1DM患者ZnT8A阳性率低于高加索人的61.5％(259/421)(P＜0.001),亦低于德国人阳性率60.0％(122/202)(P＜0.001),但与日本人ZnT8A阳性率27.8％(75/270)相比差异无显著性(P＞0.05)；④ZnT8A、GADA和IA-2A在T1DM中的阳性检出率分别为24.1％,53.4％,25.8％,ZnT8A和IA-2A阳性率要显著低于GADA(P=0.000)。ZnT8A和IA-2A的阳性率相比差异无显著性(P＞0.05)；⑤ZnT8A、GADA和IA-2A三种抗体同时阳性的占9.5％(51/539),两两重叠率最高的为GADA和IA-2A,重叠率为19.1％(103/539),其次为ZnT8A和GADA,重叠率为16.0％(86/539),最后为ZnT8A和IA-2A,重叠率为12.3％(66/539)；⑥ZnT8A、GADA和IA-2A三种抗体联合检测使自身免疫糖尿病的诊断敏感性达65.5％(353/539),在己检测GADA和IA-2A的基础上,进一步检测ZnT8A能将自身免疫阳性率由60.1％提高到65.5％。⑦在两个抗体“GADA+且IA-2A+组”中ZnTSA阳性率49.5％(51/103),要显著高于单个抗体“GADA+或IA-2A+组”中ZnT8A阳性率31.2％(101/324)(P＜0.01)。
　　 结论：①ZnT8A是T1DM患者一种独立体液免疫标志物,尤其对GADA和(或)IA-2A阴性的T1DM患者具有诊断价值；②按发病年龄与病程与国外研究匹配,不同的种族人群中ZnTSA阳性率具有差异性,中国与日本新诊T1D患者ZnT8A阳性率相似,要显著低于高加索人和德国人；③ZnT8A与GADA/IA-2A存在一定重叠率；④GADA和/或IA-2A联合ZnT8A检测能够提高T1DM的诊断敏感性；⑤在多个抗体阳性的T1DM患者中ZnTSA阳性率更高。
　　 第三部分：ZnT8A与T1DM患者临床特征的关系研究。
　　 目的：探讨ZnT8A阳性T1DM糖尿病患者的临床特征
　　 方法：采用放射配体检测法(RLA)检测539例T1DM患者ZnT8A,患者来源及特征同第二部分。同时采用放射配体法检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A),分析ZnT8A阳性T1DM糖尿病患者的临床特征。
　　 结果：①ZnT8A在BMI＜21 kg/m2,BMI为21.0～25.0 kg/m2 T1DM中的阳性率分别为24.3％,25.0％,显著高于BMI＞25.0 kg/m2的阳性率(9.3％),两者差异均具有显著性(均P＜0.05)。②ZnT8A在FCP＜150pmol/L时TlDM患者阳性率24.4％与FCP＞250pmol/L时的阳性率31.8％相比差异无显著性(P＞0.05)。③与ZnT8A阴性组比,ZnT8A阳性患者起病年龄更小,体重指数更低,血压更低,餐后2小时C肽更高(P均＜0.05),GADA和IA-2A滴度更高,合并GADA+及IA-2A+比例更高(P均＜0.001)。④单一ZnT8A阳性组较抗体阴性组病程更长,胰岛素用量更大(P均＜0.01),收缩压更低,合并代谢综合征比例更少(P均＜0.05)。单一ZnT8A阳性组较单一GADA阳性组有更高的体重指数,更高的腰臀比(P＜0.05),更低的糖化血红蛋白与更高的空腹C肽(P＜0.05),单一ZnTSA阳性组较单一IA-2A阳性组有更高的体重指数(P＜0.01)。⑤与抗体阴性组比较,ZnT8A、GADA和IA-2A三个抗体同时阳性患者表现出以下特点:起病年龄更小,体重指数更小,腰臀比更小,甘油三酯更低,合并代谢综合征比例更少(P均＜0.01)。⑥ZnT8A指数水平与IA-2A指数存在正相关(γ=0.214,P=0.000),但与GADA指数无相关性(γ=0.068,P=0.127)。
　　 结论：①ZnT8A在体型偏瘦者T1DM的阳性率要高于肥胖者,ZnT8A与胰岛功能没有明显的相关性。②ZnT8A阳性患者临床表现多样化,难以界定于经典T1DM或GADA和IA-2A均阴性的T1DM患者临床特征,可能识别一种介于经典T1DM与非经典T1DM表型之间的一种临床表型。

目录

文摘

英文文摘

缩略语

前言

第一部分 ZnT8自身抗体放射配体检测法的建立与评价

对象与方法

结果

讨论

第二部 分ZnT8自身抗体在1型糖尿病中的分布规律研究

对象与方法

结果

讨论

第三部分 ZnT8A与T1DM患者临床特征的关系研究

对象与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 锌转运体8与糖尿病

致谢

攻读学位期间主要研究成果