Apelin对大鼠坐骨神经切断后脊髓前角神经元凋亡的影响

摘要

目的：探讨坐骨神经切断缝合术后断端注射apelin蛋白对脊髓前角细胞凋亡的影响，为进一步了解apelin蛋白在阻止脊髓继发性损伤中的作用提供研究基础。
　　 方法：建立大鼠坐骨神经切断缝合术动物模型。坐骨神经切断术中神经缝合后套入硅胶管内（内径1.0mm，管长1.0cm），硅胶管远端及缝合处用凡士林封固，A组（实验组）于硅胶管内注入apelin蛋白30μl，B组（对照组）于硅胶管内注入0.9％生理盐水30μl。A、B组大鼠各为24只。于术后4h、8h、24h、72h、7d、14d6个时相点取材，切取L4-6脊髓。标本按常规固定、脱水、切片、切片厚度为5μm，每隔20张取1张切片，每个标本取10张。应用苏木精-伊红染色及凋亡细胞原位末端标记(TUNEL)法行脊髓细胞凋亡检测。
　　 结果：⑴A组在术后4h脊髓前角发现少量的TUNEL阳性细胞的表达，术后8h开始见到有典型的凋亡神经元，表现为核固缩，染色质浓缩，或形成不规则碎块，呈黄色荧光；到术后24h，凋亡细胞数增加，达到高峰，特别是大量胶质细胞凋亡；术后72h至7d凋亡的神经元细胞和胶质细胞均逐渐减少，出现不同阶段的不典型凋亡细胞，可见少量毛细血管增生，术后14d仍可见少量凋亡细胞；同时可见各时相点脊髓神经胶质细胞的凋亡比神经元的凋亡明显增多，实验组脊髓前角神经元凋亡数比对照组明显减少。⑵B组术后4h脊髓神经胶质细胞和脊髓前角神经元都出现了不同程度的细胞凋亡（细胞核内有棕黄色深染颗粒，未见典型的凋亡小体），术后8h至24h，B组的阳性标记细胞逐渐增多，可见大量脊髓前角神经元及胶质细胞凋亡；术后72h凋亡细胞达到高峰，随后逐渐减少，到术后7d凋亡细胞数量较术后8h差不多，但凋亡程度减轻，以不典型凋亡为主，术后14d仍然可以见到TUNEL阳性标记的脊髓前角神经元。A组和B组相比差异有统计学意义，(P＜0.05)。
　　 结论：应用Apelin蛋白减少了脊髓前角运动神经元的凋亡数量，对脊髓前角运动神经元可能有保护作用。

目录

文摘

英文文摘

缩略语表

第一章 前言

第二章 材料与方法

1．材料

1.1 主要仪器设备

1.2 主要试剂

1.3 实验动物

2．方法

2.1 实验分组

2.2 动物模型构建

2.3 标本采集、制备

2.4 检测指标 苏木精-伊红染色和TUNEL标记检测凋亡细胞

第三章 结果

1．常规HE染色

2．脊髓前角运动神经元细胞凋亡检测

第四章 附图

第五章 讨论

1.坐骨神经损伤致脊髓神经元及胶质细胞凋亡的可能机制

2.神经系统中神经元、轴突与效应器三者的关系

3.Apelin/APJ系统分布及分子生物学特性

4.结果分析

第六章 结论

参考文献

综述:坐骨神经切断后继发相应节段脊髓神经元损伤及Apelin蛋白的研究进展

致谢

攻读学位期间主要的研究成果目录