人参皂甙Rb1对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

摘要

第一部分、人参皂甙Rb1对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用
　　 目的：研究人参皂甙Rb1在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及其相关机制。
　　 方法：将健康雄性SD大鼠随机分为三组(n=18)：假手术组(A)、对照组(B)、人参皂甙Rb1干预组(C)。人参皂甙Rb1干预组大鼠在术前10min尾静脉注射人参皂甙Rb140mg/kg，建立肝左、中叶70％部分肝缺血再灌注模型，对照组给予同样体积的生理盐水。肝脏缺血90min后对缺血肝叶进行再灌注，分别于再灌注后2、6、24h收集血液及缺血肝叶组织标本，每个时点n=6。检测血清ALT、AST水平，肝组织HE染色后置光镜下观察病理形态学变化，并根据Suzuki’s评分标准进行病理损伤半定量评分，ELISA检测肝组织中MDA含量和SOD活力检测。
　　 结果：与对照组相比，人参皂甙Rb1干预组血清ALT、AST水平均明显下降(P<0.05)，肝脏组织病理学表现明显改善，Suzuki’s评分明显降低(P<0.05)；人参皂甙Rb1干预后肝组织MDA含量较对照组明显下降(P<0.05)，SOD活力较对照组明显升高(P<0.05)。
　　 结论：
　　 1、人参皂甙Rb1干预能有效改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤引起的肝功能和肝脏器质性损害；
　　 2、人参皂甙Rb1能减少缺血再灌注后氧自由基的产生，减轻因脂质过氧化引发的组织损伤。
　　 第二部分、人参皂甙Rb1对大鼠肝脏缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡及相关蛋白的影响
　　 目的：通过观察人参皂甙Rb1对肝脏缺血再灌注损伤中细胞凋亡及相关蛋白的影响，探讨其缺血再灌注保护作用的分子机制。
　　 方法：将健康雄性SD大鼠随机分为三组(n=18)：假手术组(A)、对照组(B)、人参皂甙Rb1干预组(C)。人参皂甙Rb1干预组大鼠于缺血前10min通过尾静脉注射人参皂甙Rb140mg/kg，建立肝左、中叶70％部分肝缺血再灌注模型，对照组给予同样体积的生理盐水。肝脏缺血90min后对缺血肝叶进行再灌注，于再灌注后6h收集缺血肝叶组织标本。TUNEL法检测肝细胞凋亡并计算肝脏细胞凋亡指数；Caspase活性定量检测试剂盒检测半胱天冬特异性蛋白酶-9，8，3(Caspase-9，8，3)的活性；免疫组织化学染色和Werstern blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达；反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏细胞Bal-c及Bax mRNA表达情况。
　　 结果：与对照组(B)比较，人参皂甙Rb1干预后肝脏细胞凋亡指数明显下降(P<0.05)，人参皂甙Rb1干预组肝组织半胱天冬特异性蛋白酶-9，8，3活性降低(P<0.05)；肝脏组织Bcl-2蛋白水平较对照组(B)显著增加(P<0.05)，肝脏组织Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)；肝脏组织中Bcl-2 mRNA较对照组(B)显著增加(P<0.05)，肝脏组织Bax mRNA明显降低(P<0.05)。
　　 结论：
　　 1、人参皂甙Rb1的干预能明显抑制缺血再灌注后肝脏细胞凋亡；
　　 2、人参皂甙Rb1抑制缺血再灌注后肝脏细胞凋亡可能与上调肝组织Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白有关。
　　 第三部分、人参皂甙Rb1抑制缺血再灌注大鼠肝脏细胞损伤凋亡与PI3K/Akt通路的相关性研究
　　 目的：观察人参皂甙Rb1对P13K/Akt信号通路的影响，深入探讨其对缺血再灌注保护作用的分子机制。
　　 方法：将健康雄性SD大鼠随机分为四组(n=6)：假手术组(A)、对照组(B)、人参皂甙Rb1干预组(C)、LY294002+人参皂甙Rb1干预组(D)。LY294002+人参皂甙Rb1干预组大鼠于缺血前20min经尾静脉缓慢注射溶解于0.02％DMSO的LY2940020.3mg/kg，于缺血前10min经尾静脉注射人参皂甙Rb140mg/kg；人参皂甙Rb1干预组大鼠于缺血前20min经尾静脉缓慢注射与D组同体积的0.02％DMSO，于缺血前10min经尾静脉注射人参皂甙Rb140mg/kg；对照组给予同样体积的0.02％DMSO和生理盐水，建立肝左、中叶70％部分肝缺血再灌注模型，肝脏缺血90min后对缺血肝叶进行再灌注，于再灌注后6h收集血液及缺血肝叶组织标本。TUNEL法检测肝细胞凋亡并计算肝脏细胞凋亡指数；免疫组织化学染色和Werstern blot检测PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达；RT-PCR检测PI3K及Akt mRNA表达水平。
　　 结果：与对照组(B)比较，人参皂甙Rb1干预组(C)肝脏细胞凋亡指数较低(P<0.05)，D组肝脏细胞凋亡指数无显著性差异(P>0.05)；PI3K和Akt蛋白在A组、B组、C组和D组中的表达水平均无显著差异(P>0.05)；P-Akt蛋白在A组、B组和D组中的表达水平无显著差异(P>0.05)，C组中p-Akt的表达明显增加(P<0.05)；PI3K和Akt蛋白在A组、B组、C组和D组中的表达水平均无显著差异(P>0.05)。
　　 结论：人参皂甙Rb1可能通过活化PI3K/Akt信号通路减少缺血再灌注后肝脏细胞凋亡。