深绿卷柏中双黄酮提取、分析及其与牛血清作用机理研究

摘要

深绿卷柏，药用卷柏属植物，由于良好的治疗效果，已引起许多领域的广泛关注。本文运用多种谱学技术对深绿卷柏中的双黄酮类化合物进行了一系列具有原创性的研究工作并取得以下很有意义的研究成果。
　　 一、在单因素实验基础上，利用响应面分析法优化深绿卷柏总黄酮超声辅助提取的工艺参数，得到最佳工艺条件为：提取温度65℃，乙醇浓度70％，提取时间50min。在此条件下，提取的总黄酮含量为4.4mg/g，提取率为7.7％。以IC50值(半数抑制浓度)为次参考指标，得出了不同提取条件下提取得到的深绿卷柏粗提物抗氧化活性数据。在最优工艺条件下，IC50值范围在20.22-46.64mg/mL之间。
　　 二、以天然药物化学为基础，运用化学及物理分离分析方法对深绿卷柏全草的乙醇提取物进行分离、纯化，得到穗花杉双黄酮和橡胶树双黄酮2个双黄酮单体化合物以及正十八烷酸、β-谷甾醇、豆甾醇等3个单体化合物。通过核磁共振、质谱等光谱学技术确定了这些单体的化学结构。
　　 三、运用GC-MS、HPLC-MS等现代的色谱技术，分析深绿卷柏中的各化学成分。从深绿卷柏中分析鉴定了59种化学成分。其中包括n-octacosane、9-octyl-hexacosane、3-phenyl-2-butanol等42种挥发性成分以及17种双黄酮化合物。穗花杉双黄酮、橡胶树双黄酮为深绿卷柏主要成分。采用反向HPLC法建立了同时测定穗花杉双黄酮和橡胶树双黄酮的检测方法。回收率大于95％。结果表明：所建立的检测方法适用于评价深绿卷柏药材的品质。采用HPLC法建立了深绿卷柏药材的指纹图谱检测方法，确定活性组分的分布及活性化合物的位置。依据此分离体系，考察了广西五个不同产地，15个样品的液相色谱图，得到深绿卷柏的参照液相指纹图谱。运用中药指纹图谱相似度计算软件对这些色谱峰进行评价，表明色谱图间的相关系数大于0.9。色谱图中有14个共有峰，可以确认为深绿卷柏的特征指纹峰。
　　 四、采用负离子检测模式下的电喷雾多级串联质谱(ESI-MS)方法对穗花杉双黄酮和罗伯斯特双黄酮的质谱裂解行为进行了研究，讨论了C3'-C8