江南卷柏提取物中穗花杉双黄酮的药动学研究

摘要

江南卷柏是卷柏科卷柏属植物江南卷柏(Selaginella moellendorfiiHieron)的干燥全草,分布于长江以南各地、北至陕西南部。有清热解毒,活血消肿的功效,用于急性传染性肝炎、胸胁腰部挫伤、全身浮肿、血小板减少等症状。
　　 江南卷柏的主要药效成分是黄酮类化合物,穗花杉双黄酮是有效成分之一,具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、降血糖和扩张血管等多种生物活性,但目前对其在药动学方面的研究尚不多见。
　　 为阐明江南卷柏中穗花杉双黄酮在体内的药动学规律,我们给家兔灌胃含有穗花杉双黄酮的黄酮提取物,用高效液相色谱仪检测家兔血清中的药物浓度,并对其进行药代动力学研究。该研究为改进新药设计,优选给药方案提供了依据,以便于该药物充分发挥其在临床用药中的疗效。
　　 1.江南卷柏黄酮提取物的制备
　　 将江南卷柏原药材粉碎、过筛,用85％的乙醇回流提取2次,每次1小时,再用石油醚脱脂3次,然后用稀醇沉淀纯化,将沉淀物减压干燥,即得黄酮提取物粉末。
　　 经高效液相色谱仪测出,该提取纯化方法得到的提取物中含穗花杉双黄酮23.41%。
　　 2.高效液相色谱法测定血清中穗花杉双黄酮的方法建立
　　 血清样品的预处理:先用饱和NaH2PO4溶液沉淀蛋白,再用乙酸乙酯萃取,然后4000rpm离心10min,再重复萃取一次,氮气吹干。残留物用500μL甲醇溶解,0.45μm岬滤膜过滤,取20μL进行液相分析。
　　 色谱条件:Cosmosil5C18-MS-Ⅱ waters(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,水溶液(含2%的四氢呋喃,0.1%的三氟乙酸)为流动相B进行梯度洗脱,pH为2.2,流速为1.0 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为335nm,进样量为20μL。
　　 结果得出,穗花杉双黄酮在血清中的线性范围为1.024～41ng(r=0.9995,n=5);低、中、高三个浓度的绝对回收率分别为(59.17±0.41)%、(54.51±0.65)%、(51.52±0.69)%,相对回收率分别为(83.98±0.98)%、(96.24±1.22)%、(100.50±1.38)%,RSD≤2%(n=6);最低检测限为0.41ng。
　　 3.穗花杉双黄酮在家兔体内的药代动力学研究
　　 用0.5%的吐温80溶解黄酮提取物粉末,以提取物0.30g/kg(相当于穗花杉双黄酮70.23mg/kg)的量给家兔灌胃,然后分别在30、45、60、75、90、120、150、180、240、360、480、720min时从耳缘静脉取血2ml。经血样处理后,用HPLC检测。得到穗花杉双黄酮符合一室模型,其药动学参数t1/2为(125.015±71.326)min,Ke(0.009±0.008)/min,V1/F为(99.586±59.97)L/kg,CL/F为(0.583±0.157)L/min/kg,AUC(0-t)为(125.521±34.387)mg/L·min,AUC(0-∞)为(136.803±36.995)mg/L·min,Ka为(0.142±0.19)/min,t1/2ka为(13.56±11.138)min,Tlag为(24.771±3.147)min。