新型HDAC抑制剂体外抑制宫颈癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

摘要

目的：研究两种新型的组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)抑制剂(简称HDACI)CC1030及CC1054对人宫颈癌细胞株HeLa、Caski的增殖抑制和诱导凋亡的作用。
　　 方法：⑴培养人宫颈癌细胞株HeLa、Caski在对数生长期加入不同浓度梯度的CC1030及CC1054进行干预，通过光学显微镜进行形态学观察，记录干预后细胞形态学的变化。⑵MTT比色法检测不同浓度梯度的CC1030及CC1054干预HeLa、Caski细胞24h、48h、72h后细胞生长抑制率，同时设置对照组和调零组，计算半数抑制浓度(IC50)，并绘制浓度-抑制率曲线及时间-抑制率图形。实验重复3次。⑶荧光显微镜下观察CC1030及CC1054作用HeLa、Caski细胞48h后细胞凋亡的情况。⑷用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测不同浓度梯度的CC1030及CC1054作用HeLa、Caski细胞48h后的细胞凋亡指数，同时设立对照组。实验重复3次。
　　 结果：①HeLa细胞镜下呈多边形或不规则形状；Caski细胞镜下呈梭形。CC1030和CC1054干预24h后开始出现细胞形态改变，细胞皱缩、拉长，细胞分裂相减少；48h后高浓度组出现大部分细胞死亡、漂浮，贴壁的活细胞形态不规则，出现多个不规则触角状改变，可见细胞碎片；72h高浓度组细胞基本死亡，剩下部分细胞碎片。②MTT比色法检测CC1030及CC1054分别在1μM、10μM、20μM、30μM、40μM浓度作用HeLa48h后，抑制率依次分别为：11.33％±1.24％、53.31％±2.90％、62.09％±3.21％、70.84％±3.46％、80.87％±2.81％、9.99％±1.37％、44.08％±2.80％、64.86％±1.49％、73.66％±2.75％、85.11％±1.19％；作用Caski48h后，抑制率依次分别为：6.83％±0.08％、33.84％±1.12％、55.44％±1.09％、69.65％±1.43％、80.63％±0.31％、16.56％±0.69％、36.35％±0.26％、68.51％±0.79％、70.52％±1.86％、89.61％±0.40％，抑制率表现出浓度和时间依赖的关系。CC1030和CC1054作用HeLa细胞48h时半数抑制率IC50分别为9.550μM、10.066μM；72h时分别为4.266μM、3.746μM；作用Caski细胞48h时半数抑制率IC50分别为14.161μM、9.072μM；72h时分别为5.042μM、5.173μM。③HeLa、Caski细胞经CC1030和CC1054作用48h后，荧光显微镜下见到早期凋亡的细胞被Annexin V-FITC染色呈现绿色荧光；晚期凋亡的细胞同时被Annexin V-FITC和PI染色，既现出红色荧光又可见绿色荧光；坏死的细胞被PI染色呈现红色荧光。④用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测CC1030和CC1054分别以10μM、20μM、30μM、40μM作用HeLa、Caski细胞48h后的凋亡指数结果：CC1030作用HeLa细胞总凋亡指数依次分别为：20.07％±3.59％、31.7％±3.85％、44.77％±7.92％、61.0％±11.67％，与对照组比较均P<0.05，有统计学差异，各浓度组间比较也均P<0.05，有统计学意义。CC1054作用HeLa细胞总凋亡指数依次分别为：18.1％±5.85％、43.73％±2.16％、45.5％±7.69％、62.27％±27.47％，与对照组比较均P<0.05，有统计学差异，各浓度组间比较20μM与30μM之间P>0.05，无统计学差异，余P<0.05，有统计学意义。空白对照组及DMSO组凋亡指数分别为6.9％±1.06％、6.33％±1.16％，两者比较P>0.05，无统计学差异。CC1030作用Caski细胞总凋亡指数依次分别为：10.17％±4.09％、23.33％±2.28％、61.13％±4.39％、66.13％±3.89％，与对照组比较除10μM浓度组外均P<0.05，有统计学差异，各浓度组间比较30μM与40μM之间P>0.05，无统计学差异，余P<0.05，有统计学意义。CC1054作用Caski细胞总凋亡指数依次分别为：6.93％±2.61％、40.1％±6.72％、56.5％±6.19％、59.13％±4.46％，与对照组比较除10μM浓度组外均P<0.05，有统计学差异，各浓度组间比较30μM与40μM之间P>0.05，无统计学差异，余P<0.05，有统计学意义。空白对照组及DMSO组凋亡指数分别为5.73％±2.27％、6.77％±2.89％，两者比较P>0.05，无统计学差异。
　　 结论：⑴CC1030及CC1054能显著的抑制人宫颈癌细胞的增殖，且抑制率表现出剂量和时间依赖的关系。⑵CC1030及CC1054能有效的诱导人宫颈癌细胞的凋亡，且凋亡指数表现出明显浓度梯度的改变。