异氟烷麻醉后老龄大鼠海马突触体比较蛋白质组学研究

摘要

目的：应用旷场试验和“Y”-迷宫测试异氟烷麻醉后老龄大鼠行为学的变化，采用双向凝胶蛋白电泳结合质谱技术分析异氟烷麻醉后老龄大鼠海马突触体蛋白质表达的差异，以此探讨异氟烷麻醉后老龄大鼠早期行为学变化的机理。
　　 方法：(1)本实验的第一章：27只筛选后的雌性22月龄SD大鼠。随机分为吸氧对照组(C组，n=6)和异氟烷麻醉组(I组，n=21)。C组吸入含80％氧气的空氧混合气体2小时，Ⅰ组以3％异氟烷麻醉诱导后，经口明视下气管插管，以2％异氟烷+80％氧气维持麻醉2小时，麻醉过程中监测大鼠生命体征的变化；两组大鼠于模型建立后24小时应用旷场实验箱和“Y”-迷宫测试行为学的变化，根据“Y”-迷宫测试结果将异氟烷麻醉组分为学习记忆能力下降组(IA)以及无学习记忆能力下降组(IB)；行为学测试完成后，取大鼠双侧海马组织液氮冻存。
　　 (2)第二章：取冻存的双侧海马组织(每组随机6只大鼠)，蔗糖梯度离心提取突触体，进行匀浆、裂解、水化制备蛋白溶液样品，应用双向凝胶电泳技术分离蛋白质，凝胶进行考马斯亮蓝染色，经扫描仪扫描获取图像，运用软件识别、合成、匹配图像，分析组间差异，切取凝胶中差异蛋白点，胰酶消化分解后进行质谱分析，获取肽指纹图，登陆互联网查询鉴定差异蛋白点，并对其进行分析和总结。
　　 结果：(1)麻醉模型建立过程中有2只大鼠被去除，大鼠生命体征平稳，异氟烷麻醉后6只大鼠有学习记忆能力的下降，IB组和C组的“Y”迷宫学会次数无明显差别，3组大鼠旷场试验测试无明显差别；(2)获得了较满意的双向凝胶电泳胶图，图象分析结果显示IA组凝胶蛋白质点为518±12，IB组为501±10，C组为508±11。IB组和IA组差异蛋白质点共有21(11/10)个；C组和IA组差异蛋白质点共有19(12/7)个，经MALDI-TOF-MS分析鉴定出31种蛋白质。IB组和IA组差异表达点鉴定出18种蛋白质，其中11种和能量代谢相关，4种与细胞骨架成分及结构变化有关；C组和IA组差异表达点鉴定出13种蛋白质，其中11种和能量代谢有关，1种为细胞骨架成分。
　　 结论：吸入2％异氟烷麻醉2h后，部分老龄大鼠(6/19)24h后有学习记忆能力的下降，可能与突触部位能量代谢的变化有关。突触部位的细胞骨架结构及其调节蛋白的变化可能参与了学习记忆能力的下降过程。