液态芯片检测胚胎培养上清中Shla-G技术的建立和应用

摘要

目的：可溶性白细胞抗原G(souluble human leukocyte antigen G，sHLA-G)是妊娠过程中母体耐受胎儿的重要免疫分子，因此sHLA-G被视为重要的非侵入性移植胚胎选择指标。而我们的研究希望能够在我室建立使用Luminex-x-MAP技术快速有效检测sHLA-G的方法。该方法所需样本体积小，速度快，有望在生殖中心实际操作。同时，我们希望根据实验数据的分析，对于如何应用sHLA-G的检测来预测移植胚胎的妊娠结局提出自己的意见。
　　 方法：随机选取中南大学湘雅医院生殖中心自2009年3月至2011年1月收集的共1182个周期的2106个胚胎的胚胎培养(embryo culture，EC)上清，用Luminex-x-MAP技术快速检测。得出的数据进行回顾性分析，分为以下几组进行比较：(1)sHLA-G与妊娠率和出生率的关系：移植胚胎数目；(2)临床与实验室参数对ART后妊娠结果的影响：移植胚胎数目、年龄、移植胚胎是否分泌sHLA-G和胚胎质量；(3)不同培养条件与sHLA-G检测的关系：培养时间、卵裂期和培养体积；(4)各种培养与检测条件是否为sHLA-G检测的影响因素：检测体积、培养体积、两者之比、培养时间、移植胚胎数目和卵裂期；(5)移植分泌sHLA-G阳性胚胎的女性分布的临床特征：年龄、授精方式、不孕原因和移植胚胎数目。
　　 结果：(1)比较了sHLA-G检测与ART的妊娠结局的关系，发现两者显著相关(P<0.001)，说明sHLA-G检测可能可以提高妊娠率。更重要的是，在单个胚胎移植时，在检测sHLA-G水平后，移植分泌sHLA-G的胚胎可以使妊娠可能成倍增加(26％)。(2)分析了实验室和临床参数对妊娠结局的影响，发现病人年龄，移植胚胎数目和形态学评分[P<0.001；OR：4.3(95％CI：2.1-8.9)]以及胚胎的sHLA-G状态(是否分泌sHLA-G)[P<0.001；OR：2.3(95％CI：1.8-3.1)]是预测妊娠结局的独立因素，而后两者更为重要。(3)比较多种培养条件与sHLA-G阳性胚胎之间的关系，仅有胚胎的卵裂期被证明是与sHLA-G检测有显著关系(P<0.001)；培养时间和培养体积与sHLA-G的检测无显著关系(P>0.05)；(4)探讨了培养与检测条件中影响sHLA-G检测的有关因素，发现仅有卵裂期是影响sHLA-G检测的唯一因素[P<0.01；OR：1.782(95％CI：1.448-2.192]，而胚胎的检测体积、培养体积与培养时间和移植胚胎数目不是影响sHLA-G的检测的因素(P>0.05)。(5)比较了女性临床特征与移植sHLA-G阳性胚胎女性分布的关系，仅有不孕原因和移植胚胎数对于移植sHLA-G阳性胚胎女性分布有显著关系(P<0.05)，其中不明原因不孕的夫妇移植sHLA-G阳性胚胎的几率更大(48.3％)；而年龄、授精方式与移植sHLA-G阳性胚胎女性分布无显著关系(P>0.05)。
　　 结论：本研究在我室建立了使用 Luminex-x-MAP技术快速有效检测sHLA-G的方法；提供了显著的证据证明形态学评分系统仍旧是目前胚胎选择移植时最重要的策略，但sHLA-G检测也可以被用来与形态学评分综合预测胚胎种植潜力，尤其当存在多个相同评级的胚胎而无法选择的时候，此策略更为适用。