PRP/Nha/pa66复合材料对前交叉韧带重建后腱-骨愈合影响的实验研究

摘要

第一章纳米羟基磷灰石/聚酰胺66复合材料前交叉韧带重建腱-骨界面栓的制备及生物学评价
　　 目的:研究制备出一种新型纳米羟基磷灰石(nanohydroxyapatite，nHA)/聚酰胺66(Polyamide66，PA66)支架材料腱-骨界面栓，并进行各项体内及体外生物学特性检测，探讨其作为组织工程支架的可行性。
　　 方法:支架制备:采用相转移法制备nHA/PA66支架材料;结构观察:观察支架大体外观，并将制备好的支架切面进行扫描电子显微镜观察;生物相容性检测:应用骨髓间充质干细胞与nHA/PA66复合材料的体外联合培养、鉴定，急性全身毒性试验，皮内刺激反应试验，肌肉植入试验等方法测定nHA/PA66复合材料的生物学性能。
　　 结果:扫描电子显微镜观察nHA/PA66复合材料的孔径大小符合设计要求;nHA/PA66复合材料对矿化诱导培养的第三代BMSCs的增殖和分化为成骨细胞的表征没有影响;试验动物未见急性毒性表现及皮内刺激反应;植入肌肉内的nHA/PA66支架材料没有引起炎症反应，并逐步降解，16周时已基本降解完全，并被骨替代。
　　 结论:本实验设计制备nHA/PA66复合材料的方法简单，各项性能参数易于控制，具有三维多孔结构，孔径分布在200-500μm范围内，符合骨组织工程的应用要求;支架与BMSCs的生物相容性良好，有利于BMSCs吸附、增殖，在骨修复过程中表现出良好的骨诱导活性;全身毒性试验，皮内刺激试验及肌肉相容性试验结果表明，nHA/PA66复合材料具有良好的生物相容性和体内成骨性能，是组织工程修复骨缺损的理想支架材料。
　　 第二章富含血小板血浆的制备及检测
　　 目的:本实验采用两步离心法制备富含血小板血浆(Platelet-richPlasm，PRP)，并对血小板源生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)进行检测，以期取得符合要求的PRP，为将来临床广泛应用提供理论支持。
　　 方法:PRP制备:无菌状态下于兔耳中央动脉取自体血10ml后进行离心处理;第一次离心后血液分为两层，吸取上层的血浆层至另一离心管，第二次离心后血浆分为两层，保留下层的即为PRP;进行PRP及全血中的血小板计数并PDGF活性测试。
　　 结果:10ml自体血可制备1.5mlPRP;全血中血小板的浓度为393.4×109/l，PRP中血小板的浓度为1751.3×109/l，PRP中血小板浓度为全血中血小板浓度的4.46倍;全血中PDGF浓度测定结果为34.21 ng/ml;PRP中PDGF浓度测定结果为142.75ng/ml，PRP中PDGF浓度为全血中的4.17倍。
　　 结论:PRP中含有对ACL重建后腱-骨愈合有利的生长因子;二次离心法是制备PRP简便有效的方法。
　　 第三章PRP/ nHA/PA66复合材料对自体半腱肌腱前交叉韧带重建后腱-骨愈合的影响的动物实验
　　 目的:本实验将支架材料nHA/PA66及PRP二者结合在一起观察对前交叉韧带(Anterior Cruciate Ligament，ACL) ACL重建后腱-骨愈合的影响效果，为将来组织工程技术能够在ACL重建手术中的广泛应用提供理论基础。
　　 方法:健康成年的新西兰大白兔60只，按实验设计分为A、B、C三组，A组胫骨隧道入口不予任何处理;B组肌腱移植物离远端约5mm处用缝线扎一肌腱环，其内置入5mm×2mm×2mm大小nHA/PA66复合物;C组肌腱移植物的肌腱环内置入滴入了PRP的5mm×2mm×2mm大小nHA/PA66的复合材料。每组2W、4W、8W、16W按时间点分别处死5只模型兔用于大体标本观察、CT扫描及三维重建、生物力学测试以及组织学观察，将各项参数与正常关节参数比较，并以此评估腱-骨界面的愈合情况。
　　 结果:1.生物力学试验:2W时各组间最大载荷无明显差异(P＞0.05)，4W、8W时各组间最大载荷呈现C＞B＞A有统计学意义(P＜0.05);16W时最大载荷C＞A(P＜0.05)、B＞A(P＜0.05)，但C、 B两组间无统计学差异(P＞0.05)。2.CT扫描及三维重建:2W时A、B、C三组间CT值均无明显差异(P＞0.05);4W、8W时A、B、C三组EA的CT值比较均表现出C＞B＞A(P＜0.05);16W时A、B、C三组EA处的CT值比较C＞A、B＞A(P＜0.05)，而C、B两组之间无明显差异(P＞0.05)。3.组织学切片:C组软骨细胞、“潮线”及止点结构出现及成熟B、A组早且好。
　　 结论:PRP含有能促进ACL重建后的腱-骨愈合的生长因子;PRP/nHA/PA66复合材料有较好的生物相容性及成骨诱导活性;通过免疫组化染色检测PDGF、BMP-2这两种生长因子是测成骨情况有效方法;PRP/nHA/PA66复合材料可以促进ACL重建后的腱-骨愈合，是韧带组织工程中一种新型的生物活性材料。

目录

声明

摘要

第一章 纳米羟基磷灰石／聚酰胺66复合材料ACL重建腱-骨界面栓的制备及生物学评价

1 BMCs与nHA／PA66多孔支架的体外联合培养、鉴定

2 检测nHA／PA66多孔支架的生物相容性的动物实验

3 结果

4 讨论

5 结论

第二章 富含血小板血浆的制备及检测

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．4 结论

第三章 PRP／nHA／PA66复合材料对自体半腱肌腱ACL重建后腱-骨愈合的影响的动物实验

3．1 材料、仪器及主要试剂

3．2 实验方法

3．3 统计学分析

3．4 结果

3．5 讨论

3．6 结论

参考文献

综述

致谢

读博期间主要成绩