内毒素血症小鼠肺组织中miRNAs的表达变化及功能的初步研究

摘要

目的:
　　 检测内毒素血症小鼠肺组织中miRNAs的表达情况，初步探讨miRNAs在内毒素血症肺损伤中可能的作用。
　　 方法:
　　 1.经腹腔注射大肠杆菌内毒素(8mg/kg)制备小鼠急性肺损伤模型，采用高通量miRNA芯片技术初步筛选出内毒素血症肺组织中差异表达的miRNAs。
　　 2.应用QRT-PCR技术检测经miRNA芯片初步筛选出的部分差异表达的miRNAs，以验证其表达是否和芯片结果一致。
　　 3.挑选出QRT-PCR验证结果与芯片结果一致的miR-1949，研究不同时间及不同剂量LPS处理后RAW264.7细胞中miR-1949的表达情况。
　　 4.应用miRNA靶基因预测软件miRDB预测miR-1949的靶基因，从中选择几个靶基因，然后分别在组织及细胞水平检测LPS处理后这些靶基因的表达情况。
　　 结果:
　　 1.经miRNA芯片检测发现，内毒素血症小鼠肺组织中共有17个miRNAs表达上调，9个miRNAs表达下调。
　　 2.经QRT-PCR验证，miR-1949、miR-223、miR-150表达与芯片结果一致，其中miR-1949、miR-223表达上调，miR-150表达下调。
　　 3.LPS处理后RAW264.7细胞中miR-1949的表达呈现时间及剂量依赖效应。
　　 4.对预测出的miR-1949的靶基因MAPK8、MAP2K1、SMEK1进行检测，发现LPS处理后肺组织及RAW264.7细胞中SMEK1表达降低，MAPK8、MAP2K1没有明显改变。
　　 结论:
　　 1.miR-1949在LPS处理后的小鼠肺组织及RAW264.7细胞中表达上调;
　　 2.miR-1949可能通过调控SMEK1的表达而在小鼠内毒素血症肺损伤中发挥作用。

目录

声明

摘要

英文缩略语

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 动物

2．1．2 细胞株

2．1．3 miRNA芯片

2．1．4 其它主要试剂

2．1．5 主要仪器

2．1．6 主要试剂的配置

2．2 方法

2．2．1 小鼠内毒素血症模型的建立及肺组织的收取

2．2．2 miRNA芯片技术检测内毒素血症小鼠肺组织中miRNAs的表达变化(由上海康成生物有限公司代检)

2．2．3 组织总RNA的提取(使用Rneasy mini kit)

2．2．4 细胞总RNA的提取(使用Rneasy mini kit)

2．2．5 miRNA的逆转录(使用miScript Reverse Transcription Kit)

2．2．6 miRNA的QRT-PCR

2．2．7 普通RNA的RT

2．2．8 普通RNA的QRT-PCR

2．2．9 组织切片及HE染色

2．2．10 引物设计合成

2．2．11 细胞培养

2．2．12 靶基因预测

2．2．13 统计学分析

第三章 结果

3．1 内毒素血症小鼠肺组织的变化

3．1．1 内毒素血症小鼠肺组织切片及HE染色

3．1．2 LPS对肺湿干重比的影响

3．2 内毒素血症小鼠肺组织中miRNAs的表达变化

3．2．1 内毒素血症小鼠肺组织的miRNA芯片检测

3．2．2 内毒素血症小鼠肺组织芯片检测miRNA表达的变化

3．2．3 内毒素血症小鼠肺组织中差异表达miRNA的验证

3．3 LPS处理后RAW264．7细胞中miR-1949的表达

3．4 miR-1949靶基因的预测及筛选

3．5 内毒素血症小鼠肺组织及LPS处理的RAW264．7细胞中靶基因的表达变化

3．5．1 内毒素血症小鼠肺组织及LPS处理的RAW264．7细胞MAP2K1的表达变化

3．5．2 内毒素血症小鼠肺组织及LPS处理的RAW264．7细胞中SMEK1的表达变化

3．5．3 内毒素血症小鼠肺组织及LPS处理的RAW264．7细胞中MAPK8的表达变化

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述

攻读硕士学位期间主要成绩

致谢