多囊卵巢综合征患者血浆降钙素基因相关肽水平变化及其病理意义

摘要

研究背景：
　　 多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是一种女性生殖功能障碍与代谢异常并存的内分泌紊乱综合征，临床表现主要为高雄激素血症、稀发或无排卵、双侧卵巢多囊样改变。除此之外，PCOS患者还兼有胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)、肥胖、黄体生成素(luteinizing hormone，LH)/卵泡刺激素(folliclestimulating hormone，FSH)比值倒置等表现。
　　 降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）是由37个氨基酸组成的小分子多肽，由降钙素基因选择性剪切编码后合成。CGRP主要在感觉神经元合成，随着感觉神经的分布释放到其支配的脏器，特异性地与CGRP受体结合发挥生物学效应。CGRP在神经系统、免疫系统、心血管系统、内分泌系统均有生物学效应，主要体现在皮肤以及内脏的痛觉产生与传递过程，促进某些炎性递质释放，舒张血管平滑肌，并涉及胰岛素抵抗和肥胖。CGRP在生殖系统的研究较少，目前仅知CGRP抑制子宫肌层收缩，调节子宫血流。但CGRP对卵巢的功能是否具有调节作用仍不清楚。有报道CGRP免疫反应阳性的神经纤维在大鼠卵巢内有分布，且在脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型，其卵巢内CGRP免疫反应阳性的神经纤维高于对照组。这些研究提示，CGRP可能在PCOS疾病的发生、发展中起作用。
　　 PCOS患者不孕的原因之一是卵子成熟障碍。卵母细胞的成熟受多因素调控，其中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)是主要的卵母细胞成熟抑制因子。研究表明，某些促进cAMP的合成或抑制cAMP的降解的物质均能使卵母细胞的成熟停滞。已知CGRP与其受体特异性结合后，受体与G蛋白耦合，通过激活腺苷酸环化酶，使细胞内cAMP含量增加，而cAMP在生殖系统可抑制卵母细胞的成熟。故而我们推测，CGRP可能影响卵母细胞的成熟，进而导致PCOS患者排卵障碍。
　　 本研究拟探讨与排卵正常的对照妇女相比，PCOS患者血浆CGRP的含量变化，并在PCOS患者中分析胰岛素抵抗、体重指数(body mass index，BMI)、LH/FSH和睾酮(testosterone，T)与血浆CGRP水平的相关性。同时在培养的卵母细胞和颗粒细胞，外源性应用CGRP处理，观察卵母细胞成熟率，以及细胞内cAMP和细胞上清中雌二醇(estradiol，E2)和T的含量变化。
　　 方法：
　　 选取2009年7月至2011年8月在我院门诊接受助孕治疗的患者318例。其中正常对照组103例，满足以下条件:(1)年龄:21-38岁之间;(2)平均月经周期在28±3天，有规律排卵;(3)不孕原因为:男方因素接受辅助生殖治疗。PCOS患者215例，满足以下条件:(1)年龄:21-38岁之间;(2)月经不规则至闭经，平均月经周期在2-3个月，临床诊断为PCOS。两组均于月经的第2-5天患者空腹抽血，检测血浆CGRP以及血浆FSH、LH、E2和睾酮水平，分析这些参数与血浆CGRP水平的相关性。215例PCOS患者进行口服糖耐量实验和胰岛素释放实验，测定稳态模型胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance, HOMA-IR)、胰岛素曲线下面积(area under the curve of insulin，AUC-insulin)和葡萄糖曲线下面积(area under the curve of glucose，AUC-glucose)，分析胰岛素抵抗与CGRP的相关性。
　　 收集6周龄健康昆明种雌性小鼠卵巢，观察CGRP在卵巢组织的表达。收集卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes，COCs)，外源性给予不同浓度CGRP(0，10-10，10-9，10-8M)培养24小时后观察生发泡破裂(germinal vesicle breakdown，GVBD)率和第一极体(first polar body，PBI)排出率。收集黄素化的人卵巢颗粒细胞，检测CGRP受体mRNA表达;以不同浓度CGRP(0，10-10，10-9，10-8M)培养24小时，观察细胞内cAMP和上清液中E2和T的含量变化。
　　 结果：
　　 (1)对照人群与PCOS患者在年龄、身高和血浆E2水平间无差异，FSH水平对照人群高于PCOS患者（6.98±0.16 vs6.51±0.10 mIU/ml，P＜0.01），而体重（50.7±0.5 vs56.3±0.6 kg），BMI（20.46±0.21vs22.73±0.22 kg/m2），血浆LH水平(4.57±0.20 vs8.48±0.37mIU/ml)，LH/FSH比值（0.66±0.03 vs1.29±0.05），血浆T水平(0.34±0.16 vs0.43±0.01 ng/ml)对照人群均低于PCOS患者（P＜0.01）。
　　 (2) PCOS患者血浆CGRP水平显著高于对照人群（6.14±0.29 ng/Lvs4.48±0.25 ng/L，P＜0.05）。
　　 (3) PCOS患者血浆CGRP浓度与HOMA-IR，AUC-insulin，AUC-glucose显著正相关。对照人群、PCOS患者及所有受试者中血浆CGRP水平与血浆LH/FSH比值、T水平显著正相关，而与BMI无明显相关性。
　　 (4)以LH/FSH的比值分层，在PCOS患者中随着LH/FSH比值的升高，CGRP水平亦明显增高，LH/FSH＞2的患者同LH/FSH＜1的患者比较，其CGRP水平有显著性差异;以BMI=24分层，PCOS患者中BMI＜24及BMI≥24的患者间CGRP水平无显著性差异。
　　 (5)人颗粒细胞表达CGRP受体mRNA。小鼠卵巢组织有CGRP表达，以卵母细胞及卵巢间质组织表达量较多。CGRP可浓度依赖性地抑制小鼠卵母细胞生发泡破裂和第一极体排出。CGRP可浓度依赖性地升高人颗粒细胞内cAMP浓度以及细胞上清液中T和E2水平。
　　 结论：
　　 本研究首次发现PCOS患者血浆CGRP水平高于因男方因素不孕的对照女性，且PCOS患者血浆CGRP与胰岛素抵抗、LH/FSH、高雄激素血症显著正相关。首次发现颗粒细胞表达CGRP受体，外源性CGRP可抑制卵母细胞成熟，其机制可能与增加颗粒细胞内cAMP含量、促进颗粒细胞释放T和E2有关。这些结果提示CGRP可能参与PCOS的病理生理过程。CGRP可能是诊断PCOS或判断其预后的一种新生物标记物，可望成为治疗的新靶点。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 多囊卵巢综合征患者血浆CGRP水平及其与代谢参数和性激素水平的相关性分析

第一节 多囊卵巢综合征患者的性激素和代谢特征分析及血浆中CGRP水平变化

1．前言

2．材料和方法

3．结果

4．讨论

5．结论

第二节 多囊卵巢综合征患者血浆CGRP水平与代谢参数和性激素水平的相关性

1．前言

2．材料和方法

3．结果

4．讨论

5．结论

第二章 CGRP对卵母细胞体外成熟的影响

1．前言

2．材料与方法

3．结果

4．讨论

5．结论

参考文献

综述

致谢

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