杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质合成的影响

摘要

目的:研究杜仲木脂素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质合成的影响，阐明杜仲木脂素保护高血压肾损害的具体机制。
　　 方法:采用大鼠肾小球系膜（HBZY-1）细胞，实验分为7组:对照组、AngⅡ诱导组(10-8 mol/L AngⅡ)、依帕司他组（10-8 mol/L AngⅡ+20μmol/L依帕司他）、氯沙坦组（10-8 mol/L AngⅡ+20μmol/L氯沙坦）、低浓度杜仲木脂素组(10-8mol/L AngⅡ+20 mg/L杜仲木脂素)、中浓度杜仲木脂素组(10-8 mol/L AngⅡ+40 mg/L杜仲木脂素)和高浓度杜仲木脂素组(10-8 mol/L AngⅡ+80 mg/L杜仲木脂素)。各组细胞在含1％新生牛血清培养基中孵育48 h，采用MTT一步法检测A490值来评估细胞数;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和蛋白质印迹(Westernblot)法检测细胞外基质Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、Ⅳ胶原蛋白(ColⅣ)、纤连蛋白(FN)以及醛糖还原酶(AR)的mRNA和蛋白表达水平。
　　 结果:
　　 (1)与对照组相比，10-8 mol/L AngⅡ组细胞数增加，差异具有统计学意义(1.76±0.06 vs1.67±0.05，P＜0.05)。与AngⅡ组比较，氯沙坦组(1.63±0.04 vs1.76±0.06，P＜0.01)、依帕司他组(1.65±0.04 vs1.76±0.06，P＜0.01)和不同浓度木脂素组(1.68±0.05，1.58±0.07，1.59±0.07 vs1.76±0.06，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01)细胞数减少，差异具有统计学意义。
　　 (2)与对照组相比，10-8 mol/L AngⅡ能够显著增加ColⅣ(2.33±0.13 vs1.00±0.31, P＜0.01)、FN(1.17±0.04vs1.00±0.08,P＜0.01)、ColⅠ(1.36±0.05vs1.00±0.05,P＜0.01)、ColⅢ(1.31±0.03 vs1.00±0.04, P＜0.01)和AR(1.35±0.04 vs1.00±0.11, P＜0.01)mRNA水平。
　　 与AngⅡ组相比，氯沙坦可明显降低ColⅣ(1.28±0.09 vs2.33±0.13, P＜0.01)、FN(0.79±0.03vs1.17±0.04, P＜0.01)、ColⅠ(1.07±0.11 vs1.36±0.05, P＜0.01)、ColⅢ(1.11±0.04vs1.31±0.03,P＜0.01)和AR（1.22±0.03vs1.35±0.04，P＜0.05）mRNA水平，差异具有统计学意义。
　　 与AngⅡ组比较，低中高浓度木脂素均显著降低FN(0.86±0.06,0.90±0.03,0.67±0.01 vs1.17±0.04,P＜0.01)、ColⅠ(0.75±0.01,0.67±0.05,0.55±0.01 vs1.36±0.05,P＜0.01)、ColⅢ(0.78±0.07,0.34±0.02,0.18±0.01 vs1.31±0.03,P＜0.01)和AR(1.08±0.03,0.98±0.09,0.86±0.08 vs1.35±0.04,P＜0.01)mRNA水平，差异具有统计学意义;高浓度木脂素组显著减少ColⅣmRNA(1.51±0.21 vs2.33±0.13,P＜0.01)水平，差异具有统计学意义，低中浓度木脂素组(1.76±0.77,1.66±0.62 vs2.33±0.13,P=0.084,P=0.134)具有降低趋势，但差异无统计学意义。
　　 与AngⅡ组相比，依帕司他组FN(0.76±0.03 vs1.17±0.04,P＜0.01)、ColⅠ(1.25±0.05 vs1.36±0.05,P＜0.05)和ColⅢ(0.68±0.02 vs1.31±0.03,P＜0.01)mRNA水平明显下降，差异具有统计学意义;AR(3.78±0.13 vs1.35±0.04,P＜0.01)，差异具有统计学意义;ColⅣ(2.54±0.14 vs2.33±0.13,P=0.275)mRNA水平上升，但差异不具有统计学意义。
　　 (3)与对照组相比，10-8 mol/L AngⅡ能够显著增加ColⅣ(2.18±0.26 vs1.00±0.02, P＜0.01)、FN(2.43±0.03 vs1.00±0.07,P＜0.01)、ColⅠ(1.29±0.05 vs1.00±0.04,P＜0.01)、ColⅢ(5.08±0.21 vs1.00±0.43,P＜0.01)和AR(2.02±0.08 vs1.00±0.08,P＜0.01)蛋白水平。
　　 与AngⅡ组相比，氯沙坦组ColⅣ(0.47±0.15 vs2.18±0.26,P＜0.01)、FN(0.17±0.01 vs2.43±0.03,P＜0.01)、ColⅠ(0.47±0.02vs1.29±0.05,P＜0.01)、ColⅢ(0.91±0.36 vs5.08±0.21,P＜0.01)和AR(0.35±0.15 vs2.02±0.08,P＜0.01)蛋白水平降低，差异具有统计学意义。
　　 与AngⅡ组比较，低中高浓度木脂素均显著降低ColⅣ(1.71±0.07,1.58±0.08,0.50±0.14 vs2.18±0.26,P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)、FN(0.19±0.09,0.40±0.12,0.20±0.10 vs2.43±0.03,P＜0.01)、ColⅠ(0.76±0.01,0.71±0.02,0.66±0.02 vs1.29±0.05,P＜0.01)、ColⅢ(2.78±0.21,1.94±0.37,1.44±0.39 vs5.08±0.21,P＜0.01)和AR(0.52±0.17,0.66±0.22,0.45±0.23 vs2.02±0.08，P＜0.01)蛋白水平，差异具有统计学意义。
　　 与AngⅡ组相比，依帕司他组FN(2.07±0.06 vs2.43±0.03，P＜0.01)、ColⅠ(1.07±0.02 vs1.29±0.05,P＜0.01)和ColⅢ(1.12±0.46 vs5.08±0.21，P＜0.01)蛋白水平下降，差异具有统计学意义;ColⅣ(2.71±0.42 vs2.18±0.26,P＜0.01)和AR(3.13±0.24 vs2.02±0.08，P＜0.01)蛋白水平上升，差异具有统计学意义。
　　 结论:
　　 (1) AngⅡ促进HBZY-1中ColⅢ和AR表达，氯沙坦对AngⅡ诱导的ColⅢ和AR表达具有抑制作用。
　　 (2)木脂素能拮抗AngⅡ诱导的HBZY-1增殖和细胞外基质成分(ColⅣ、FN、ColⅠ和ColⅢ)及AR的表达。
　　 (3)依帕司他能够抑制AngⅡ诱导的HBZY-1增殖和细胞外基质成分（FN、ColⅠ和ColⅢ）表达。

目录

声明

摘要

第一章 前言

第二章 实验材料与方法

2．1 试剂及仪器

2．2 大鼠肾小球系膜细胞培养

2．3 实验设计及方法

2．3．1 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导HBZY-1增殖的影响

2．3．2 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导细胞外基质成分和AR mRNA表达的作用

2．3．3 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导细胞外基质成分和AR蛋白表达的作用

2．4 统计学处理

第三章 结果

3．1 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的HBZY-1增殖的影响

3．1．1 不同浓度杜仲木脂素对HBZY-1生长的影响

3．1．2 不同浓度Ang Ⅱ对HBZY-1生长的影响

3．1．3 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的HBZY-1增殖的影响

3．2 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导细胞外基质成分和AR表达的影响

3．2．1 PCR最佳退火温度

3．2．2 扩增效率

3．2．3 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的细胞外基质成分和AR mRNA表达的影响

3．2．4 杜仲木脂素对Ang Ⅱ诱导的细胞外基质成分和AR蛋白表达的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述

致谢

在读期间的研究成果