清炎败毒饮对烧伤SD大鼠小肠粘膜细胞凋亡的影响

摘要

目的:清火败毒饮方(qinghuobaiduyin，QHBDY)为中南大学湘雅三医院烧伤整形科的临床验方，主要由黄芪、金银花、黄芩、麦冬和大黄组成，其主要作用包括清热解毒，活血祛瘀，益气养阴等，自1996年来应用于临床，效果良好。本科室以往的研究表明清火败毒饮方(qinghuobaiduyin，QHBDY)对特重度烧伤患者的体液免疫、细胞免疫功能均有明显调节作用，且为双向性调节。本研究主要是探讨清火败毒饮(qinghuobaiduyin，QHBDY)对烧伤SD大鼠小肠粘膜的保护作用及其对肠粘膜细胞凋亡的影响。
　　 方法:选择健康SD(Sprague-Dawley)大鼠45只，雌雄不拘，随机分为对照组、单纯烧伤组（称烧伤组）、烧伤后QHBDY治疗组（称治疗组）。对照组n=5只，烧伤组n=20只，分别于烧伤后6h、12h、24h、48h4个时间点取标本，每个时间点设有5只大鼠。治疗组n=20，于烧伤前24小时内以含生药1.0g/L的QHBDY方汤剂1.0ml/100g剂量对大鼠经口腔灌胃两次做预处理，分别于烧伤后6、12、24、48h4个时间点取小肠粘膜组织，每个时间点设有5只SD大鼠。治疗组每只大鼠在伤后5分钟内以含生药1.0g/L的QHBDY方汤剂1.0ml/100g经口腔灌胃。以免疫组织化学的方法检测分析各组小肠粘膜组织凋亡因子Caspase-3、Bcl-2的表达情况，以TUNEL法检测分析各组小肠组织粘膜组织细胞凋亡情况，同时观测各组小肠组织粘膜的病理形态学变化。
　　 结果:伤后各时间点小肠粘膜细胞凋亡率均较对照组明显升高(P＜0.05)，伤后6-12小时细胞凋亡到达高峰，24小时明显减少，48小时又出现第二次升高;治疗组除6小时时间点外其余各时间点细胞凋亡率分别低于烧伤组相同时间点细胞凋亡率且有统计学意义(P＜0.05)。伤后各时间点Caspase-3的表达均较对照组明显升高且有统计学意义(P＜0.05)，伤后6-12小时Caspase-3表达最高，24小时又开始降低，48小时又出现第二次升高;治疗组除6小时时间点外其余各时间点Caspase-3的表达水平分别低于烧伤组相同时间点Caspase-3的表达水平且有统计学意义(P＜0.05)。伤后各时间点Bcl-2表达均较对照组降低且有统计学意义(P＜0.05)，伤后6-12小时Bcl-2表达最低，24小时已经开始升高，48小时又出现第二次降低;治疗组除6小时时间点外其余各时间点Bcl-2的表达水平和烧伤组相同时间点Bcl-2的表达水平之间的差异均具有显著性(P＜0.05)。病理形态学变化显示对照组小肠粘膜组织结构完整无损伤，烧伤早期SD大鼠小肠粘膜组织损伤明显，治疗组SD大鼠小肠粘膜组织损伤较烧伤组明显减轻。
　　 结论:应用QHBDY具有抗小肠粘膜细胞凋亡，减轻烧伤后肠粘膜损伤作用。QHBDY明显增强烧伤早期SD大鼠小肠粘膜组织细胞内Bcl-2的表达以及降低Caspase-3的表达，这可能是其抗小肠粘膜细胞凋亡、保护肠粘膜的机制之一。小肠粘膜细胞凋亡可能是严重烧伤早期大鼠小肠粘膜组织损伤的重要原因之一。

目录

声明

摘要

主要英文缩写词表

前言

第一章 实验设计思路图

第二章 实验仪器及所用试剂

1．1 实验仪器

1．2 试验试剂及耗材

第三章 实验材料与方法

3．1 实验对象

3．1．1 实验动物

3．1．2 研究对象：小肠粘膜组织

3．2 主要试剂的配制

3．2．1 清火败毒饮汤剂的制备

3．2．2 10％水合氯醛溶液的配制

3．2．3 磷酸盐缓冲液(PBS)的配制方法

3．2．4 柠檬酸盐修复溶液的配制方法

3．3 烧伤模型制作、实验动物分组及标本采取

3．3．1 SD大鼠重度烧伤模型制作

3．3．2 动物分组

3．3．3 标本采集及处理

3．4 指标检测与观察

3．4．1 TUNEL法检测细胞凋亡

3．4．2 小肠粘膜细胞Bcl-2、Caspase-3表达检测

3．4．3 HE染色与结果观察

3．4．4 统计学处理

第四章 结果

4．1 各实验组SD大鼠小肠粘膜组织细胞凋亡情况

4．1．1 各实验组SD大鼠小肠粘膜组织细胞凋亡的分布

4．1．2 各实验组不同时间点SD大鼠小肠粘膜组织细胞凋亡率的变化

4．1．3 烧伤组和治疗相应时间点小肠粘膜组织细胞凋亡率的变化

4．2 各实验组小肠粘膜细胞Caspase-3的表达情况

4．2．1 各实验组不同时间点小肠粘膜细胞Caspase-3的表达变化情况

4．2．2 烧伤组各治疗组相应时间点SD大鼠小肠粘膜组织Caspase-3表达的变化

4．3 各实验组小肠粘膜细胞Bcl-2的表达情况

4．3．1 各实验组内不同时间点小肠粘膜细胞Bcl-2的表达变化情况

4．3．2 烧伤组和治疗组相应时间点SD大鼠小肠粘膜组织Bcl-2表达的变化

4．4 各实验组SD大鼠小肠粘膜组织病理形态学变化

第五章 讨论

5．1 严重烧伤早期SD大鼠小肠粘膜细胞凋亡率的变化及QHBDY的影响

5．2 严重烧伤早期SD大鼠小肠粘膜细胞中Bcl-2、Caspase-3的表达及QHBDY的影响

第六章 结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间主要的研究成果