苦参素对HSC-T6增殖和活化的影响及机制的初步探讨

摘要

目的：以大鼠肝星状细胞株HSC-T6为实验对象，通过以下三方面的实验，研究苦参素对HSC-T6细胞株的影响并初步探讨其发生机制。一、观察苦参素对HSC-T6增殖的影响;二、检测苦参素对HSC-T6活化的影响;三、检测苦参素对端粒酶表达的影响。
　　 方法：以浓度为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL的苦参素分别作用于肝星状细胞不同时间(24h、48h和72h)，采用MTT比色法检测苦参素对肝星状细胞增殖的影响。用逆转录聚合酶链式反应检测与肝星状细胞活化有关的指标:α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原和TIMP-1mRNA的表达，同时检测rTERTmRNA的表达变化。
　　 结果：苦参素可以抑制肝星状细胞的增殖，随着作用浓度升高和时间的延长，苦参素对肝星状细胞增殖的抑制作用逐渐增强。苦参素作用24h，加药组组和对照组的α-SMA、ColⅠ、ColⅢ及TIMP-1mRNA表达的差异无统计学意义(P＞0.05），而rTERTmRNA在苦参素组的表达高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05）。苦参素作用48h，浓度为6mg/mL苦参素组的α-SMA和TIMP-1mRNA表达低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05），但是ColⅠ、ColⅢ和rTERTmRNA表达和对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05）;苦参素作用72h，各苦参素组ColⅠ、ColⅢ和rTERTmRNA的表达与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05），而4mg/mL和6mg/mL苦参素组的α-SMA和TIMP-1mRNA表达低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：1、苦参素可以抑制肝星状细胞的增殖，抑制作用随着时间和浓度的增加而增强;
　　 2、苦参素能够抑制肝星状细胞的活化，可抑制基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)的表达;
　　 3、苦参素对活化的肝星状细胞内的Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原的合成没有影响;
　　 4、苦参素对肝星状细胞的影响可能和端粒酶有关。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

第一章 前言

第二章 材料和方法

2．1 实验材料

2．1．1 细胞来源

2．1．2 试剂与耗材

2．1．3 仪器与设备

2．1．4 耗材的清洗

2．1．5 溶液的配制

2．2 实验方法

2．2．1 细胞培养

2．2．2 MTT法检测细胞增殖

2．2．3 RNA的提取和逆转录反应

2．2．4 聚合酶链式反应(PCR)

2．3 统计分析

第三章 实验结果

3．1 MTT结果

3．1．1 苦参素对肝星状细胞形态及数量的影响

3．1．2 苦参素对肝星状细胞生存率的影响

3．2 聚合酶链式反应(PCR)

3．2．1 苦参素对HSC-T6表达α-SMAmRNA的影响

3．2．2 苦参素对HSC-T6表达Col ⅠmRNA的影响

3．2．3 苦参素对HSC-T6表达Col ⅢmRNA的影响

3．2．4 苦参素对HSC-T6表达TIMP-1mRNA的影响

3．2．5 苦参素对HSC-T6表达rTERTmRNA的影响

第四章 讨论

4．1 苦参素抑制肝星状细胞增殖

4．2 苦参素抑制HSC-T6的α-SMAmRNA表达

4．3 苦参素对HSC-T6的Col Ⅰ、Col ⅢmRNA表达无影响

4．4 苦参素抑制HSC-T6的TIMP-1mRNA的表达

4．5 苦参素对HSC-T6表达rTERTmRNA的影响

第五章结论

参考文献

综述

致谢

攻读硕士学位期间研究成果