竹节参多糖提取分离和免疫调节及抗肿瘤活性研究

摘要

目的：
　　 建立竹节参多糖(Panax japonicus polysaccharide，PJPS)含量的测定方法，获得合理、稳定、效率高的PJPS提取工艺，探讨其在免疫调节和抗肿瘤方面的活性。
　　 方法：
　　 1、以无水葡萄糖为标准品，采用分光光度法，对蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法的测定条件和方法学进行考察，并比较两种方法测定竹节参多糖含量的结果。
　　 2、以PJPS提取率为考察指标，以单因素实验为基础，采用正交试验确定最佳提取工艺，通过木瓜蛋白酶法、分步醇沉对PJPS进行精制。
　　 3、通过小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、迟发型超敏反应(Delayed-type hypersensitivity，DTH)实验、血清溶血值测定实验从非特异性免疫应答、细胞性免疫应答和体液免疫应答三个方面研究PJPS对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫调节能力。
　　 4、采用MTT法检测不同浓度PJPS分别在24 h、48 h及72 h对人肺癌细胞HTB182、人肠癌细胞SW480、人肾癌细胞HEK293、人鼻咽癌细胞5-8F及人肝癌细胞HepG2增殖的作用。
　　 结果：
　　 1、蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法均可用于测定竹节参中多糖含量，但蒽酮硫酸法的测定结果高于苯酚硫酸法，其标准曲线的线性，稳定性和重现性均优于苯酚硫酸法。
　　 2、PJPS的最佳提取工艺为:40倍溶剂用量，浸泡40 min，100℃，提取两次，每次4h。木瓜蛋白酶法能较好地去除PJPS中的蛋白质，分步醇沉实验将PJPS分为PJPSⅠ和PJPSⅡ两部分。
　　 3、PJPS能显著提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，且与阳性对照香菇多糖组的作用相当，对免疫低下小鼠的廓清指数K和吞噬指数α具有明显的提高作用，也能明显改善免疫低下小鼠的脾脏和胸腺指数及血清中IgM水平，且对免疫低下小鼠血清中IgM水平改善程度明显优于阳性对照香菇多糖。
　　 4、与阴性对照组相比，不同浓度PJPSS在24 h、48 h、72 h对人肺癌细胞HTB182、人肠癌细胞SW480、人肾癌细胞HEK293、人鼻咽癌细胞5-8F及人肝癌细胞HepG2增殖无显著性影响。
　　 结论
　　 1、蒽酮硫酸法更适于测定竹节参中多糖的含量，此方法简单快速，重现性好，测定结果可靠。
　　 2、PJPS的最佳提取工艺为:40倍溶剂用量，浸泡40 min，100℃，提取两次，每次4h。
　　 3、PJPS能从非特异性免疫应答、细胞性免疫应答和体液免疫应答三个方面不同程度地调节环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能。
　　 4、PJPS对人肺癌细胞HTB182、人肠癌细胞SW480、人肾癌细胞HEK293、人鼻咽癌细胞5-8F及人肝癌细胞HepG2无增殖抑制作。

目录

声明

摘要

前言

第一章 竹节参多糖含量测定方法研究

1 仪器与试药

1．1 仪器

1．2 试剂与药品

2 方法与结果

2．1 试剂与溶液的配制

2．2 蒽酮硫酸法测定条件考察

2．3 苯酚硫酸法测定条件考察

2．4 标准曲线的制作

2．5 精密度考察

2．6 稳定性考察

2．7 重复性实验

2．8 加样回收率测定

2．9 竹节参多糖含量测定比较

3 小结

第二章 竹节参多糖的提取、分离及精制

1 仪器与试药

1．1 仪器

1．2 试剂与药品

2 方法

2．1 药材吸水率的考察

2．2 单因素实验

2．3 正交实验

2．4 验证实验

2．5 竹节参多糖的分离、精制

3 结果

3．1 药材吸水率的考察

3．2 单因素实验

3．3 正交实验

3．4 验证实验

3．5 竹节参多糖的分离、精制

4 小结

第三章 竹节参多糖的免疫调节作用

1 实验材料

1．1 实验仪器

1．2 试剂与药品

1．3 实验动物

2 实验方法

2．1 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

2．2 小鼠碳粒廓清实验

2．3 迟发型超敏反应(DTH)实验

2．4 血清溶血值测定实验

3 实验结果

3．1 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

3．2 碳粒廓清实验

3．3 迟发型超敏反应(DTH)实验

3．4 血清溶血值测定实验

4 小结

第四章 竹节参多糖体外抗肿瘤作用的实验研究

1 实验材料

1．1 实验仪器

1．2 试剂与药品

1．3 肿瘤细胞株

2 实验方法

2．1 试剂与溶液的配制

2．2 实验步骤

3 实验结果

3．1 竹节参多糖对人鼻咽癌细胞5-8F增殖的影响

3．2 竹节参多糖对人肺癌细胞HTB182增殖的影响

3．3 竹节参多糖对人肾癌细胞HEK293增殖的影响

3．4 竹节参多糖对人胃癌细胞SW480增殖的影响

3．5 竹节参多糖对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

4 小结

讨论

结论

展望

参考文献

综述

致谢

攻读硕士期间主要研究成果